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Generation of novel Id2 and E2-2, E2A and HEB antibodies reveals novel Id2 binding partners and species-specific expression of E-proteins in NK cells.
Molecular Immunology ( IF 3.2 ) Pub Date : 2018-08-23 , DOI: 10.1016/j.molimm.2018.08.017 Jai Rautela 1 , Laura F Dagley 1 , Tobias Kratina 1 , Angaleena Anthony 1 , Wilford Goh 1 , Elliot Surgenor 1 , Rebecca B Delconte 1 , Andrew I Webb 1 , Ngaire Elwood 2 , Joanna R Groom 1 , Fernando Souza-Fonseca-Guimaraes 1 , Lynn Corcoran 1 , Nicholas D Huntington 1
Molecular Immunology ( IF 3.2 ) Pub Date : 2018-08-23 , DOI: 10.1016/j.molimm.2018.08.017 Jai Rautela 1 , Laura F Dagley 1 , Tobias Kratina 1 , Angaleena Anthony 1 , Wilford Goh 1 , Elliot Surgenor 1 , Rebecca B Delconte 1 , Andrew I Webb 1 , Ngaire Elwood 2 , Joanna R Groom 1 , Fernando Souza-Fonseca-Guimaraes 1 , Lynn Corcoran 1 , Nicholas D Huntington 1
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NK cells are cytotoxic lymphocytes with a key role in limiting tumour metastases. In mice, the NK cell lineage continually expresses high levels of the Inhibitor of DNA-binding 2 (Id2) protein and loss of Id2 is incongruous with their survival due to aberrant E-protein target gene activity. Using novel Id2 and E-protein antibodies that detect both mouse and human proteins, we have extensively characterised Id2 and E-protein expression in murine and human NK cells. We detected clear expression of E2 A and HEB, and to a lesser extent E2-2 in murine NK cells. In contrast HEB appears to be the major E-protein expressed in human NK cells, with minor E2-2 expression and surprisingly, no E2 A detected in primary NK cells nor human NK cell lines. These novel antibodies are also functional in immunofluorescence and immunoprecipitation. Mass spectrometry analysis of Id2 immuno-precipitated from murine NK cells revealed a number of novel associated proteins including several members of the SWI/SNF-related matrix-associated actin-dependent regulator chromatin (SMARC) and Mediator complex (MED) families. Taken together, these data highlight the utility of novel Id2 and E-protein antibodies and caution against mouse models for understanding Id2/E-protein biology in NK cells given their clearly disparate expression patternbetween species.
中文翻译：
新型Id2和E2-2，E2A和HEB抗体的产生揭示了NK细胞中新型Id2结合伴侣和E蛋白的物种特异性表达。
NK细胞是细胞毒性淋巴细胞，在限制肿瘤转移中起关键作用。在小鼠中，NK细胞谱系持续表达高水平的DNA结合2（Id2）抑制剂，由于异常的E蛋白靶基因活性，Id2的丧失与它们的存活不符。使用检测小鼠和人类蛋白质的新型Id2和E蛋白抗体，我们已广泛表征了鼠和人NK细胞中Id2和E蛋白的表达。我们检测到小鼠NK细胞中E2 A和HEB的表达清楚，而E2-2的表达程度较低。相反，HEB似乎是在人NK细胞中表达的主要E蛋白，具有少量的E2-2表达，而且令人惊讶的是，在原代NK细胞或人NK细胞系中均未检测到E2A。这些新型抗体在免疫荧光和免疫沉淀中也起作用。从鼠NK细胞免疫沉淀的Id2的质谱分析揭示了许多新颖的相关蛋白，包括SWI / SNF相关基质相关的肌动蛋白依赖性调节染色质（SMARC）和介体复合体（MED）家族的几个成员。综上所述，这些数据突出了新型Id2和E蛋白抗体的效用，并且由于它们在物种之间的明显不同的表达方式，因此请谨慎使用小鼠模型以了解NK细胞中Id2 / E蛋白的生物学特性。
更新日期：2018-08-23
中文翻译：
新型Id2和E2-2，E2A和HEB抗体的产生揭示了NK细胞中新型Id2结合伴侣和E蛋白的物种特异性表达。
NK细胞是细胞毒性淋巴细胞，在限制肿瘤转移中起关键作用。在小鼠中，NK细胞谱系持续表达高水平的DNA结合2（Id2）抑制剂，由于异常的E蛋白靶基因活性，Id2的丧失与它们的存活不符。使用检测小鼠和人类蛋白质的新型Id2和E蛋白抗体，我们已广泛表征了鼠和人NK细胞中Id2和E蛋白的表达。我们检测到小鼠NK细胞中E2 A和HEB的表达清楚，而E2-2的表达程度较低。相反，HEB似乎是在人NK细胞中表达的主要E蛋白，具有少量的E2-2表达，而且令人惊讶的是，在原代NK细胞或人NK细胞系中均未检测到E2A。这些新型抗体在免疫荧光和免疫沉淀中也起作用。从鼠NK细胞免疫沉淀的Id2的质谱分析揭示了许多新颖的相关蛋白，包括SWI / SNF相关基质相关的肌动蛋白依赖性调节染色质（SMARC）和介体复合体（MED）家族的几个成员。综上所述，这些数据突出了新型Id2和E蛋白抗体的效用，并且由于它们在物种之间的明显不同的表达方式，因此请谨慎使用小鼠模型以了解NK细胞中Id2 / E蛋白的生物学特性。
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