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Rapid Neutralization Testing System for Zika Virus Based on an Enzyme-Linked Immunospot Assay.
ACS Infectious Diseases ( IF 4.0 ) Pub Date : 2019-12-30 , DOI: 10.1021/acsinfecdis.9b00333 Shuxuan Li 1 , Huan Zhao 1 , Hongwei Yang 1 , Wangheng Hou 1 , Ruth Cruz-Cosme 2 , Ruiyuan Cao 3 , Chunye Chen 1 , Wei Wang 1 , Longfa Xu 1 , Jun Zhang 1 , Wu Zhong 3 , Ningshao Xia 1 , Qiyi Tang 2 , Tong Cheng 1
ACS Infectious Diseases ( IF 4.0 ) Pub Date : 2019-12-30 , DOI: 10.1021/acsinfecdis.9b00333 Shuxuan Li 1 , Huan Zhao 1 , Hongwei Yang 1 , Wangheng Hou 1 , Ruth Cruz-Cosme 2 , Ruiyuan Cao 3 , Chunye Chen 1 , Wei Wang 1 , Longfa Xu 1 , Jun Zhang 1 , Wu Zhong 3 , Ningshao Xia 1 , Qiyi Tang 2 , Tong Cheng 1
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Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne flavivirus that has been associated with neuropathology in fetuses and adults, imposing a serious health concern. Therefore, the development of a vaccine is a global health priority. Notably, neutralization tests have a significant value for vaccine development and virus diagnosis. The cytopathic effect (CPE)-based neutralization test (Nt-CPE) is a common neutralization method for ZIKV. However, this method has some drawbacks, such as being time-consuming and labor-intensive and having low-throughput, which precludes its application in the detection of large numbers of specimens. To improve this problem, we developed a neutralization test based on an enzyme-linked immunospot assay (Nt-ELISPOT) for ZIKV and performed the assay in a 96-well format. A monoclonal antibody (mAb), 11C11, with high affinity and reactivity to ZIKV was used to detect ZIKV-infected cells. To optimize this method, the infectious dose of ZIKV was set at a multiplicity of infection (MOI) of 0.0625, and a detection experiment was performed after incubating for 24 h. As a result, under these conditions, the Nt-ELISPOT had good consistency with the traditional Nt-CPE to measure neutralizing titers of sera and neutralizing antibodies. Additionally, three neutralizing antibodies against ZIKV were screened by this method. Overall, we successfully developed an efficient neutralization test for ZIKV that is high-throughput and rapid. This Nt-ELISPOT can potentially be applied to detecting neutralizing titers of large numbers of specimens in vaccine evaluation and neutralizing antibody screening for ZIKV.
中文翻译：
基于酶联免疫斑点法的寨卡病毒快速中和测试系统。
寨卡病毒（ZIKV）是一种蚊子传播的黄病毒，已与胎儿和成年人的神经病理学相关，引起了严重的健康问题。因此，开发疫苗是全球健康的重中之重。值得注意的是，中和测试对于疫苗开发和病毒诊断具有重要价值。基于细胞病变效应（CPE）的中和试验（Nt-CPE）是ZIKV常用的中和方法。然而，该方法具有一些缺点，例如费时且劳动强度大且通量低，这使得其无法用于大量样品的检测。为了改善此问题，我们开发了基于酶联免疫斑点法（Nt-ELISPOT）的ZIKV的中和测试，并以96孔格式进行了该测试。单克隆抗体（mAb）11C11，与ZIKV具有高亲和力和反应性的蛋白被用来检测被ZIKV感染的细胞。为了优化该方法，将ZIKV的感染剂量设置为0.0625的感染复数（MOI），并在孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。为了优化该方法，将ZIKV的感染剂量设置为0.0625的感染复数（MOI），并在孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。为了优化该方法，将ZIKV的感染剂量设置为0.0625的感染复数（MOI），并在孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。通过这种方法筛选了三种针对ZIKV的中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。通过这种方法筛选了三种针对ZIKV的中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。
更新日期：2019-12-16
中文翻译：
基于酶联免疫斑点法的寨卡病毒快速中和测试系统。
寨卡病毒（ZIKV）是一种蚊子传播的黄病毒，已与胎儿和成年人的神经病理学相关，引起了严重的健康问题。因此，开发疫苗是全球健康的重中之重。值得注意的是，中和测试对于疫苗开发和病毒诊断具有重要价值。基于细胞病变效应（CPE）的中和试验（Nt-CPE）是ZIKV常用的中和方法。然而，该方法具有一些缺点，例如费时且劳动强度大且通量低，这使得其无法用于大量样品的检测。为了改善此问题，我们开发了基于酶联免疫斑点法（Nt-ELISPOT）的ZIKV的中和测试，并以96孔格式进行了该测试。单克隆抗体（mAb）11C11，与ZIKV具有高亲和力和反应性的蛋白被用来检测被ZIKV感染的细胞。为了优化该方法，将ZIKV的感染剂量设置为0.0625的感染复数（MOI），并在孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。为了优化该方法，将ZIKV的感染剂量设置为0.0625的感染复数（MOI），并在孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。为了优化该方法，将ZIKV的感染剂量设置为0.0625的感染复数（MOI），并在孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。孵育24小时后进行检测实验。结果，在这些条件下，Nt-ELISPOT与传统的Nt-CPE具有良好的一致性，可以测量血清的中和效价和中和抗体。另外，通过该方法筛选了针对ZIKV的三种中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。通过这种方法筛选了三种针对ZIKV的中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。通过这种方法筛选了三种针对ZIKV的中和抗体。总体而言，我们成功开发了针对ZIKV的高效，高通量且快速的中和测试。这种Nt-ELISPOT可以潜在地用于检测疫苗评估中大量标本的中和效价和ZIKV的中和抗体筛选。
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