Abstract Fucosylated chondroitin sulfate (FCScs) isolated from sea cucumber Cucumaria syracusana was characterized by Fourier Transform InfraRed spectroscopy (FT-IR), Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy and high performance size exclusion chromatograph, a multi-angle laser light scattering detector, a viscometer and a differential refractive index (dRI) detector (HPSEC-MALLS-dRI). The anticoagulant activities of FCScs were studied by the classical clotting time assays and the purified systems containing thrombin and antithrombin or heparin cofactor II. The effect on thrombin generation was investigated using calibrated automated thrombography (CAT). The results obtained showed that the FCS with high sulfate content 31 % and relatively low average molecular weight of 36.3 kDa was isolated from C. syracusana in amount of ∼ 35.6 mg/g dry body wall. Structural analysis of this polysaccharide revealed the presence backbone structure of chondroitin sulfate chain branched by two types of fucose 2,4-O-di and 3,4-O-disulfated residues in respective ratios of 57.5 and 42.5 %. The FCScs exhibited a high anticoagulant activity mediated essentially by heparin cofactor II (HCII) and to lesser extent by antithrombin (AT) with IC50 values of 0.05 μg/mL and 0.09 μg/mL, respectively. Furthermore, the results of CAT assay showed that the velocity index decreases 3-times at 50 μg/mL in comparison with normal plasma. The overall results showed high anticoagulant activity attributed to the high sulfate content and abundance of disulfated fucose branches of FCScs which made it a promising candidate of anticoagulation drug.

中文翻译：

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从 Cucumaria syracusana 中分离的岩藻糖化硫酸软骨素的抗凝活性

摘要 从海参 Cucumaria syracusana 中分离的岩藻糖基化硫酸软骨素 (FCScs) 通过傅里叶变换红外光谱 (FT-IR)、核磁共振 (NMR) 光谱和高性能尺寸排阻色谱、多角度激光光散射检测器、粘度计和示差折光 (dRI) 检测器 (HPSEC-MALLS-dRI)。FCScs 的抗凝活性通过经典的凝血时间测定和含有凝血酶和抗凝血酶或肝素辅因子 II 的纯化系统进行研究。使用校准的自动血栓形成术 (CAT) 研究了对凝血酶生成的影响。所得结果表明，从 C. syracusana 中分离到的 FCS 具有 31% 的高硫酸盐含量和 36.3 kDa 的相对较低的平均分子量，数量约为 35。6 毫克/克干体壁。这种多糖的结构分析揭示了硫酸软骨素链的骨架结构，由两种类型的岩藻糖 2,4-O-二和 3,4-O-二硫酸化残基以 57.5% 和 42.5% 的比例分支。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。这种多糖的结构分析揭示了硫酸软骨素链的骨架结构，由两种类型的岩藻糖 2,4-O-二和 3,4-O-二硫酸化残基以 57.5% 和 42.5% 的比例分支。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。这种多糖的结构分析揭示了硫酸软骨素链的骨架结构，由两种类型的岩藻糖 2,4-O-二和 3,4-O-二硫酸化残基以 57.5% 和 42.5% 的比例分支。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。4-O-二和 3,4-O-二硫酸化残基的比例分别为 57.5% 和 42.5%。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。4-O-二和 3,4-O-二硫酸化残基的比例分别为 57.5% 和 42.5%。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。FCScs 表现出高抗凝活性，主要由肝素辅因子 II (HCII) 介导，并在较小程度上由抗凝血酶 (AT) 介导，IC50 值分别为 0.05 μg/mL 和 0.09 μg/mL。此外，CAT 测定结果显示，与正常血浆相比，速度指数在 50 μg/mL 时降低了 3 倍。总体结果表明，高抗凝活性归因于 FCScs 的高硫酸盐含量和二硫酸化岩藻糖分支的丰度，这使其成为有希望的抗凝药物候选者。