MicroRNA166 (miR166) contributes to post-transcriptional regulation by binding the mRNAs of HD-ZIP III genes, which affects plant growth and development. The structural characteristics, expression, and functions of miR166 genes during the early somatic embryogenesis stage in Dimocarpus longan remain unknown. We isolated the transcripts of pri-miR166 S78 with two transcription initiation sites (TSSs) and pri-miR166 S338 with one TSS. These sequences contain potential smORFs and encode different miRNA peptides (miPEPs). Additionally, their promoters contain cis-acting elements responsive to diverse stimuli. The pre-miR166 S78 and pre-miR166 S338 expression levels were up-regulated in response to 2,4-D, abscisic acid, and ethylene. Although the expression patterns induced by hormones were similar, there were differences in the extent of the response, with pre-miR166 S338 more responsive than pre-miR166 S78. Thus, miRNA transcription and maturation are not simply linearly correlated. Moreover, pre-miR166 S78 and pre-miR166 S338 expression levels were down-regulated, whereas ATHB15 (target gene) expression was up-regulated, from the longan embryonic callus to the globular embryo stages. These results are indicative of a negative regulatory relationship between miR166 and ATHB15 during the early somatic embryogenesis stage in longan. At the same stages, miR166a.2-agomir, miR166a.2-antagomir, and miPEP166 S338 increased or decreased the expression of miR166a.2 and ATHB15, but with no consistent patterns or linear synchronization, from which we've found some reasons for it.

中文翻译：

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龙眼果体体胚发生早期的microRNA166基因结构，表达和功能分析。

MicroRNA166（miR166）通过与HD-ZIP III基因的mRNA结合而有助于转录后调控，从而影响植物的生长发育。龙眼Diocarpus longan体细胞胚发生早期的miR166基因的结构特征，表达和功能仍然未知。我们分离了具有两个转录起始位点（TSS）的pri-miR166 S78的转录本和具有一个TSS的pri-miR166 S338的转录本。这些序列包含潜在的smORF，并编码不同的miRNA肽（miPEP）。另外，它们的启动子含有对多种刺激有反应的顺式作用元件。响应2,4-D，脱落酸和乙烯，pre-miR166 S78和pre-miR166 S338表达水平上调。尽管激素诱导的表达方式相似，但反应程度有所不同，与miR166 S78之前版本相比，premiR166 S338的响应速度更快。因此，miRNA的转录和成熟并非简单地线性相关。此外，从龙眼胚愈伤组织到球形胚阶段，pre-miR166 S78和pre-miR166 S338的表达水平下调，而ATHB15（靶基因）的表达上调。这些结果表明在龙眼的体细胞胚发生早期，miR166和ATHB15之间存在负调控关系。在同一阶段，miR166a.2-agomir，miR166a.2-antagomir和miPEP166 S338增加或减少了miR166a.2和ATHB15的表达，但是没有一致的模式或线性同步，因此我们发现了一些原因它。miRNA的转录和成熟并不简单地线性相关。此外，从龙眼胚愈伤组织到球形胚阶段，pre-miR166 S78和pre-miR166 S338的表达水平下调，而ATHB15（靶基因）的表达上调。这些结果表明在龙眼的体细胞胚发生早期，miR166和ATHB15之间存在负调控关系。在同一阶段，miR166a.2-agomir，miR166a.2-antagomir和miPEP166 S338增加或减少了miR166a.2和ATHB15的表达，但是没有一致的模式或线性同步，因此我们发现了一些原因它。miRNA的转录和成熟并不简单地线性相关。此外，从龙眼胚愈伤组织到球形胚阶段，pre-miR166 S78和pre-miR166 S338的表达水平下调，而ATHB15（靶基因）的表达上调。这些结果表明在龙眼的体细胞胚发生早期，miR166和ATHB15之间存在负调控关系。在相同阶段，miR166a.2-agomir，miR166a.2-antagomir和miPEP166 S338增加或减少了miR166a.2和ATHB15的表达，但没有一致的模式或线性同步，因此我们发现了一些原因它。从龙眼胚愈伤组织到球形胚阶段。这些结果表明在龙眼的体细胞胚发生早期，miR166和ATHB15之间存在负调控关系。在同一阶段，miR166a.2-agomir，miR166a.2-antagomir和miPEP166 S338增加或减少了miR166a.2和ATHB15的表达，但是没有一致的模式或线性同步，因此我们发现了一些原因它。从龙眼胚愈伤组织到球形胚阶段。这些结果表明在龙眼的体细胞胚发生早期，miR166和ATHB15之间存在负调控关系。在同一阶段，miR166a.2-agomir，miR166a.2-antagomir和miPEP166 S338增加或减少了miR166a.2和ATHB15的表达，但是没有一致的模式或线性同步，因此我们发现了一些原因它。