A method for the simultaneous quantification of B vitamins and related amines in one-carbon (1C) metabolism would benefit the study of diet and genetic/epigenetic regulation of mammalian development and health. We present a validated method for the simultaneous quantitative analysis of 13 B vitamers and four related 1C-pathway amine intermediates in liver using hydrophilic interaction chromatography (HILIC) coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry. Frozen sheep liver samples (50 mg) were homogenized in cold 50% acetonitrile containing 1% acetic acid with the addition of two isotope labelled internal standards. Hot acid hydrolysis was applied to release the protein-bound forms. The separation of 17 analytes was achieved using a pHILIC column with a total run time of 13 min. Detection was achieved in electrospray positive ionisation mode. Limits of detection for the majority of analytes were within the range of 0.4-3.2 pmol/g. The method was applied to 266 sheep liver samples and revealed that adenosylcobalamin, methylcobalamin, pyridoxic acid, flavin adenine dinucleotide and thiamine were the major forms of the B vitamers present with pyridoxal 5'-phosphate and thiamine pyrophosphate being detected at lower concentrations. Trimethylglycine and methylglycine were the predominant 1C-related amines measured. As anticipated, the B vitamin status of individuals varied considerably, reflecting dietary and genetic variation in our chosen outbred model species. This method offers a simple sample extraction procedure and provides comprehensive coverage of B vitamins coupled with good sensitivity and reliability.

中文翻译：

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哺乳动物肝脏中B维生素和相关化合物的全面定量分析。

一种同时定量一碳（1C）代谢中B维生素和相关胺的方法将有益于饮食和哺乳动物发育与健康的遗传/表观遗传调控研究。我们提出了一种通过亲水相互作用色谱法（HILIC）与电喷雾电离串联质谱联用同时定量分析肝脏中13 B维生素和四种相关1C途径胺中间体的验证方法。将冷冻的绵羊肝样品（50 mg）在含有1％乙酸的50％冷乙腈中匀浆，并添加两个同位素标记的内标。应用热酸水解以释放蛋白质结合形式。使用pHILIC色谱柱实现了17种分析物的分离，总运行时间为13分钟。检测是在电喷雾正电离模式下完成的。大多数分析物的检出限在0.4-3.2 pmol / g的范围内。该方法应用于266个绵羊肝样品，发现腺苷钴胺素，甲基钴胺素，吡ido酸，黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是吡喃醛酸5'-磷酸和硫胺素焦磷酸素的B型维生素的主要形式。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。大多数分析物的检出限在0.4-3.2 pmol / g的范围内。该方法应用于266个绵羊肝样品，发现腺苷钴胺素，甲基钴胺素，吡ido酸，黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是吡喃醛酸5'-磷酸和硫胺素焦磷酸素的B型维生素的主要形式。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。大多数分析物的检出限在0.4-3.2 pmol / g的范围内。该方法应用于266个绵羊肝样品，发现腺苷钴胺素，甲基钴胺素，吡ido酸，黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是吡喃醛酸5'-磷酸和硫胺素焦磷酸素的B型维生素的主要形式。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。4-3.2 pmol / g。该方法应用于266个绵羊肝样品，发现腺苷钴胺素，甲基钴胺素，吡ido酸，黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是吡喃醛酸5'-磷酸和硫胺素焦磷酸素的B型维生素的主要形式。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。4-3.2 pmol / g。该方法应用于266个绵羊肝样品，发现腺苷钴胺素，甲基钴胺素，吡ido酸，黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是吡喃醛酸5'-磷酸和硫胺素焦磷酸素的B型维生素的主要形式。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是B族维生素的主要形式，吡x醛5'-磷酸和硫胺素焦磷酸盐的浓度较低。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素是B族维生素的主要形式，吡x醛5'-磷酸和硫胺素焦磷酸盐的浓度较低。三甲基甘氨酸和甲基甘氨酸是主要的1C相关胺。正如预期的那样，个体的B维生素状态变化很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。个体的B维生素状态差异很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。个体的B维生素状态差异很大，反映出我们选择的近交模型物种的饮食和遗传变异。该方法提供了简单的样品提取程序，并全面覆盖了B族维生素，并具有良好的灵敏度和可靠性。