BACKGROUND Endothelial cells (ECs) play a key role in tissue homeostasis, in several pathological conditions, and specifically in the control of vascular functions. ECs are frequently used as in vitro model systems for cardiovascular studies and vascular biology. The porcine model is commonly used in human clinical cardiovascular studies. Currently, however, there is no robust protocol for the isolation of porcine heart ECs. We have developed a fast isolation protocol, which is cost effective, takes only 1-2 h, and produces EC purity of over 97%. This protocol is optimized for porcine hearts but can be adapted for use with other large animals. METHODS Heart is washed by flushing with PBS, whereafter endothelial cells are detached by collagenase incubation and the cells can then be collected immediately after the incubation and plated within an hour after the heart is isolated from a pig. RESULTS The swiftness of the protocol limits changes in the phenotype and RNA expression profile of the cells. Cells were identified as ECs with CD31 (PECAM-1) antibody immunostaining. Functionality of ECs were ensured with in vitro angiogenesis assay. The purity of the ECs was verified by using fluorescence assisted cell sorting (FACS) with the CD31 antibody. CONCLUSION We developed a new, fast, and cost-effective isolation method for pig heart ECs. Successful isolation of pure ECs is a prerequisite for several cardiovascular and vascular biology studies.

中文翻译：

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从猪心脏中分离新鲜内皮细胞用于心血管研究：一种适用于基因组，转录组学和细胞生物学研究的新型快速方案。

背景技术内皮细胞（EC）在组织稳态中，在几种病理状况中，特别是在血管功能的控制中起关键作用。EC通常用作心血管研究和血管生物学的体外模型系统。猪模型通常用于人类临床心血管研究。但是，目前，尚无用于分离猪心脏EC的可靠方案。我们开发了一种快速隔离协议，该协议具有成本效益，仅需1-2小时，并且产生的EC纯度超过97％。该协议已针对猪的心脏进行了优化，但可以适用于其他大型动物。方法用PBS冲洗心脏，之后，通过胶原酶温育使内皮细胞脱离，然后在温育后立即收集细胞，并在从猪分离出心脏后的一小时内将其铺板。结果协议的迅速性限制了细胞的表型和RNA表达谱的变化。通过CD31（PECAM-1）抗体免疫染色将细胞鉴定为EC。ECs的功能通过体外血管生成测定得以确保。通过使用带有CD31抗体的荧光辅助细胞分选（FACS）验证EC的纯度。结论我们开发了一种新的，快速且具有成本效益的猪心脏EC分离方法。成功地分离出纯ECs是数项心血管和血管生物学研究的前提。结果协议的迅速性限制了细胞的表型和RNA表达谱的变化。通过CD31（PECAM-1）抗体免疫染色将细胞鉴定为EC。ECs的功能通过体外血管生成测定得以确保。通过使用带有CD31抗体的荧光辅助细胞分选（FACS）验证EC的纯度。结论我们开发了一种新的，快速且具有成本效益的猪心脏EC分离方法。成功地分离出纯ECs是数项心血管和血管生物学研究的前提。结果协议的迅速性限制了细胞的表型和RNA表达谱的变化。通过CD31（PECAM-1）抗体免疫染色将细胞鉴定为EC。ECs的功能通过体外血管生成测定得以确保。通过使用带有CD31抗体的荧光辅助细胞分选（FACS）验证EC的纯度。结论我们开发了一种新的，快速且具有成本效益的猪心脏EC分离方法。成功地分离出纯ECs是数项心血管和血管生物学研究的前提。通过使用带有CD31抗体的荧光辅助细胞分选（FACS）验证EC的纯度。结论我们开发了一种新的，快速且具有成本效益的猪心脏EC分离方法。成功地分离出纯ECs是数项心血管和血管生物学研究的前提。通过使用带有CD31抗体的荧光辅助细胞分选（FACS）验证EC的纯度。结论我们开发了一种新的，快速且具有成本效益的猪心脏EC分离方法。成功地分离出纯ECs是数项心血管和血管生物学研究的前提。