BACKGROUND AIMS Allogeneic hematopoietic stem cell transplantation is curative for sickle cell disease, and the use of matched related donors, non-myeloablative conditioning and sirolimus immunosuppression results in stable mixed chimerism without graft-versus-host disease (GVHD). However, the time to terminate sirolimus while maintaining mixed chimerism is unclear. METHODS In this study, we developed a two-way mixed lymphocyte reaction (MLR) to evaluate ex vivo immunoreaction in mixed chimeric patients. RESULTS In co-culture of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from two healthy controls (without irradiation), we detected proliferation at various ratios of PBMC mixtures (1:9 to 9:1) as well as various concentrations of sirolimus, suggesting that two-way MLR is applicable to patients (having >10% chimerism) undergoing sirolimus treatment. In two-way MLR using PBMCs (including donor and recipient cells) from mixed chimeric patients (n = 28), greater ex vivo proliferation was observed <6 months compared with >6 months post-transplant and healthy control PBMC monoculture. Robust ex vivo proliferation was observed in a patient with acute GVHD, and persistent ex vivo proliferation (until 2 years) was observed in a patient with decreasing donor chimerism. CONCLUSIONS In summary, we demonstrated that in two-way MLR, ex vivo immunoreaction decreases to low levels ~6 months post-transplant. These findings suggest a rationale to continue immunosuppression for 6 months.

中文翻译：

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镰状细胞病匹配相关供体异基因移植后稳定混合嵌合患者的离体免疫学评价

背景目的同种异体造血干细胞移植可治愈镰状细胞病，并且使用匹配的相关供体、非清髓性调理和西罗莫司免疫抑制导致稳定的混合嵌合体，没有移植物抗宿主病 (GVHD)。然而，在维持混合嵌合状态的同时终止西罗莫司的时间尚不清楚。方法 在这项研究中，我们开发了一种双向混合淋巴细胞反应 (MLR) 来评估混合嵌合患者的离体免疫反应。结果 在来自两个健康对照（未照射）的外周血单核细胞 (PBMC) 的共培养中，我们检测到不同比例的 PBMC 混合物（1:9 至 9:1）以及不同浓度的西罗莫司的增殖，表明双向 MLR 适用于患者（具有 > 10% 嵌合体）正在接受西罗莫司治疗。在使用来自混合嵌合患者（n = 28）的 PBMC（包括供体和受体细胞）的双向 MLR 中，与移植后 >6 个月和健康对照 PBMC 单一培养相比，<6 个月观察到更大的离体增殖。在患有急性 GVHD 的患者中观察到强烈的体外增殖，并在供体嵌合体减少的患者中观察到持续的体外增殖（直到 2 年）。结论 总之，我们证明在双向 MLR 中，离体免疫反应在移植后约 6 个月降至低水平。这些发现表明了继续免疫抑制 6 个月的理由。6 个月与移植后 6 个月以上和健康对照 PBMC 单一培养相比。在患有急性 GVHD 的患者中观察到强烈的体外增殖，并在供体嵌合体减少的患者中观察到持续的体外增殖（直到 2 年）。结论 总之，我们证明在双向 MLR 中，离体免疫反应在移植后约 6 个月降至低水平。这些发现表明了继续免疫抑制 6 个月的理由。6 个月与移植后 6 个月以上和健康对照 PBMC 单一培养相比。在患有急性 GVHD 的患者中观察到强烈的体外增殖，并在供体嵌合体减少的患者中观察到持续的体外增殖（直到 2 年）。结论 总之，我们证明在双向 MLR 中，离体免疫反应在移植后约 6 个月降至低水平。这些发现表明了继续免疫抑制 6 个月的理由。离体免疫反应在移植后约 6 个月降至低水平。这些发现表明了继续免疫抑制 6 个月的理由。离体免疫反应在移植后约 6 个月降至低水平。这些发现表明了继续免疫抑制 6 个月的理由。