Parathyroid hormone (PTH) directly interacts with bone remodeling osteoblasts and osteocytes expressing the G-protein coupled receptor PTH receptor 1 (PTH1R), and its osteoanabolic effects mostly involve the cAMP/PKA signaling cascade. Considering that PTH-dependent calcium entry in rat enterocytes is reproduced by the adenylate cyclase agonist forskolin or by cAMP analogues, possible involvement of calcium as a second messenger in PTH-dependent cAMP signaling was investigated in MG-63 cells. First, Ca2+ influx was confirmed in Fluo3-loaded MG-63 cells treated with a cell-permeable cAMP analog. Second, PTH (1-34) and forskolin promoted calcium influxes that were completely abrogated by the PKA inhibitor H-89. Ca2+ entry was not reproduced when PTH (1-34) was combined with the PKC-activating competitor PTH (3-34). Vanilloid transient potential (TRPV) channel inhibitor Ruthenium Red, but not a voltage-dependent calcium channel (VDCC) inhibitor nifedipine, efficiently stunted Ca2+ entry, and comparable abrogation was reproduced in cells treated with TRPV4-selective inhibitor RN-1734 or transfected with TRPV4-specific siRNA. Interestingly, PTH-driven Ca2+ through TRPV4 significantly inhibited MG63 cell migration through a mechanism requiring extracellular Ca2+. In contrast, the inhibitory effects of forskolin on migration were refractory to TRPV4 silencing or to RN-1734. Altogether, our results indicate that single treatment with PTH (1-34) promotes extracellular calcium entry through TRPV4 channels in MG-63 cells through a cAMP/PKA-dependent mechanism, and that this influx affects cell migration.

中文翻译：

---

在成骨细胞样MG-63细胞中，瞬态受体电位香草酸4（TRPV4）通道的环状腺苷一磷酸依赖性激活。

甲状旁腺激素（PTH）与表达G蛋白偶联受体PTH受体1（PTH1R）的骨重塑成骨细胞和骨细胞直接相互作用，其骨代谢作用主要涉及cAMP / PKA信号级联。考虑到腺苷酸环化酶激动剂福司柯林或cAMP类似物可复制大鼠肠上皮细胞中PTH依赖性钙的进入，因此在MG-63细胞中研究了钙可能作为第二信使参与PTH依赖性cAMP信号传导。首先，在用可渗透细胞的cAMP类似物处理过的Fluo3加载的MG-63细胞中证实了Ca2 +内流。其次，PTH（1-34）和福司可林促进了钙内流，PKA抑制剂H-89完全消除了钙内流。当PTH（1-34）与PKC激活竞争对手PTH（3-34）结合使用时，不会复制Ca2 +进入。Vanilloid瞬态电位（TRPV）通道抑制剂Ruthenium Red，而不是电压依赖性钙通道（VDCC）抑制剂硝苯地平，有效阻碍了Ca2 +的进入，并在用TRPV4选择性抑制剂RN-1734处理或转染TRPV4的细胞中复制了类似的废止特异性siRNA。有趣的是，通过TRPV4的PTH驱动的Ca2 +通过需要细胞外Ca2 +的机制显着抑制了MG63细胞的迁移。相反，毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行的单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。但不是电压依赖性钙通道（VDCC）抑制剂硝苯地平，不能有效阻止Ca2 +进入，并且在用TRPV4选择性抑制剂RN-1734处理或用TRPV4特异性siRNA转染的细胞中可再生的废除。有趣的是，通过TRPV4的PTH驱动的Ca2 +通过需要细胞外Ca2 +的机制显着抑制了MG63细胞的迁移。相反，毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行的单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。但不是电压依赖性钙通道（VDCC）抑制剂硝苯地平，有效地阻碍了Ca2 +的进入，并且在用TRPV4选择性抑制剂RN-1734处理或用TRPV4特异性siRNA转染的细胞中可再生的废除。有趣的是，通过TRPV4的PTH驱动的Ca2 +通过需要细胞外Ca2 +的机制显着抑制了MG63细胞的迁移。相反，毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。并在用TRPV4选择性抑制剂RN-1734处理或用TRPV4特异性siRNA转染的细胞中复制了可比的废止。有趣的是，通过TRPV4的PTH驱动的Ca2 +通过需要细胞外Ca2 +的机制显着抑制了MG63细胞的迁移。相反，毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。并在用TRPV4选择性抑制剂RN-1734处理或用TRPV4特异性siRNA转染的细胞中复制了可比的废止。有趣的是，通过TRPV4的PTH驱动的Ca2 +通过需要细胞外Ca2 +的机制显着抑制了MG63细胞的迁移。相反，毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行的单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。毛喉素对迁移的抑制作用对TRPV4沉默或RN-1734无效。总而言之，我们的结果表明，通过cAMP / PKA依赖性机制，用PTH（1-34）进行的单次处理可促进MG-63细胞中TRPV4通道的细胞外钙进入，并且这种流入会影响细胞迁移。