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Applicability of the OECD 455 in-vitro assay for determination of hERa agonistic activity of isoflavonoids.
Toxicology and Applied Pharmacology ( IF 3.3 ) Pub Date : 2019-11-20 , DOI: 10.1016/j.taap.2019.114831 Darja Gramec Skledar 1 , Václav Tvrdý 2 , Maša Kenda 1 , Anamarija Zega 1 , Milan Pour 3 , Pavel Horký 3 , Přemysl Mladěnka 2 , Marija Sollner Dolenc 1 , Lucija Peterlin Mašič 1
Toxicology and Applied Pharmacology ( IF 3.3 ) Pub Date : 2019-11-20 , DOI: 10.1016/j.taap.2019.114831 Darja Gramec Skledar 1 , Václav Tvrdý 2 , Maša Kenda 1 , Anamarija Zega 1 , Milan Pour 3 , Pavel Horký 3 , Přemysl Mladěnka 2 , Marija Sollner Dolenc 1 , Lucija Peterlin Mašič 1
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The Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD)-validated transactivation assay using the human estrogen receptor alpha (hERα) Hela9903 cell line is used for activity evaluation of hERα agonists and antagonists. Due to many advantages, this assay is broadly used as an initial screening process. However, response significantly higher from that of 17-β estradiol (E2) was observed with phytoestrogens for concentrations commonly above 1 μM in previous studies. The main aim of this study was thus to ascertain the applicability of OECD protocol 455 for evaluation of estrogenic activity of natural flavonoids, including known phytoestrogens. The estrogenic activities of aglycones as well as of O-methylated and glycosylated flavonoids were evaluated. Supra-maximal luciferase activity was seen for most of the flavonoids tested at concentrations even below 1 μM. hERα-mediated luciferase expression was confirmed with the competition assay specified in OECD protocol 455. However, at concentrations above 1 μM, non-specific interactions were also observed. Instead of EC50 values, which could not be determined for most of the isoflavonoids tested, the concentrations corresponding to 10% (PC10) and 50% (PC50) of the maximum activity of the positive control, E2, were used for quantitative determination of estrogenic activities. Appropriate evaluation of the data obtained with the current OECD protocol 455 validated assay represents a valuable tool for initial screening of natural flavonoids for estrogenic activity.
中文翻译：
OECD 455 体外测定法测定异黄酮类 hERa 激动活性的适用性。
经济合作与发展组织 (OECD) 使用人雌激素受体 α (hERα) Hela9903 细胞系验证的反式激活试验用于评估 hERα 激动剂和拮抗剂的活性。由于许多优点，该测定被广泛用作初始筛选过程。然而，在先前的研究中，对于浓度通常高于 1 μM 的植物雌激素，观察到的响应明显高于 17-β 雌二醇 (E2)。因此，本研究的主要目的是确定 OECD 协议 455 在评估天然黄酮类化合物（包括已知植物雌激素）的雌激素活性方面的适用性。评价了苷元以及 O-甲基化和糖基化黄酮类化合物的雌激素活性。甚至在低于 1 μM 的浓度下测试的大多数黄酮类化合物都具有超最大荧光素酶活性。hERα 介导的萤光素酶表达已通过 OECD 协议 455 中规定的竞争分析得到证实。然而，在高于 1 μM 的浓度下，也观察到了非特异性相互作用。使用对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度来定量测定雌激素活动。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。hERα 介导的萤光素酶表达已通过 OECD 协议 455 中规定的竞争分析得到证实。然而，在高于 1 μM 的浓度下，也观察到了非特异性相互作用。使用对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度来定量测定雌激素活动。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。hERα 介导的萤光素酶表达已通过 OECD 协议 455 中规定的竞争分析得到证实。然而，在高于 1 μM 的浓度下，也观察到了非特异性相互作用。使用对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度来定量测定雌激素活动。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。对于大多数测试的异黄酮无法确定，对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度用于雌激素活性的定量测定。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。对于大多数测试的异黄酮无法确定，对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度用于雌激素活性的定量测定。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。
更新日期：2019-11-20
中文翻译：
OECD 455 体外测定法测定异黄酮类 hERa 激动活性的适用性。
经济合作与发展组织 (OECD) 使用人雌激素受体 α (hERα) Hela9903 细胞系验证的反式激活试验用于评估 hERα 激动剂和拮抗剂的活性。由于许多优点，该测定被广泛用作初始筛选过程。然而，在先前的研究中，对于浓度通常高于 1 μM 的植物雌激素，观察到的响应明显高于 17-β 雌二醇 (E2)。因此，本研究的主要目的是确定 OECD 协议 455 在评估天然黄酮类化合物（包括已知植物雌激素）的雌激素活性方面的适用性。评价了苷元以及 O-甲基化和糖基化黄酮类化合物的雌激素活性。甚至在低于 1 μM 的浓度下测试的大多数黄酮类化合物都具有超最大荧光素酶活性。hERα 介导的萤光素酶表达已通过 OECD 协议 455 中规定的竞争分析得到证实。然而，在高于 1 μM 的浓度下，也观察到了非特异性相互作用。使用对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度来定量测定雌激素活动。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。hERα 介导的萤光素酶表达已通过 OECD 协议 455 中规定的竞争分析得到证实。然而，在高于 1 μM 的浓度下，也观察到了非特异性相互作用。使用对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度来定量测定雌激素活动。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。hERα 介导的萤光素酶表达已通过 OECD 协议 455 中规定的竞争分析得到证实。然而，在高于 1 μM 的浓度下，也观察到了非特异性相互作用。使用对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度来定量测定雌激素活动。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。对于大多数测试的异黄酮无法确定，对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度用于雌激素活性的定量测定。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。对于大多数测试的异黄酮无法确定，对应于阳性对照 E2 最大活性的 10% (PC10) 和 50% (PC50) 的浓度用于雌激素活性的定量测定。对使用当前经合组织协议 455 验证的测定法获得的数据进行适当评估是初步筛选天然黄酮类化合物的雌激素活性的宝贵工具。
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