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Detergent-free isolation of native red blood cell membrane complexes.
Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes ( IF 2.8 ) Pub Date : 2019-11-16 , DOI: 10.1016/j.bbamem.2019.183126 Alexandra Desrames 1 , Sandrine Genetet 1 , Maëlenn Païline Delcourt 1 , Dominique Goossens 2 , Isabelle Mouro-Chanteloup 1
Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes ( IF 2.8 ) Pub Date : 2019-11-16 , DOI: 10.1016/j.bbamem.2019.183126 Alexandra Desrames 1 , Sandrine Genetet 1 , Maëlenn Païline Delcourt 1 , Dominique Goossens 2 , Isabelle Mouro-Chanteloup 1
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Over the past few decades, studies on the red blood cell (RBC) membrane gave rise to increasingly sophisticated although divergent models of its structural organization, since investigations were often performed in denaturing conditions using detergents. To access soluble isolated RBC membrane complexes with the preservation of their interactions and conformations, we decided to apply the recent SMALP (Styrene Maleic Acid Lipid Particles) technology to RBC ghosts. Depending on the ionic strength of buffers in which ghost membranes were resuspended, the isolated proteins within SMALPs could differ on Coomassie-stained gels, but with few changes when compared to ghost membrane SDS lysates. We subsequently produced SMALPs derived from ghosts from two different blood group phenotypes, RhD-positive and RhD-negative, both types of RBC expressing the RhCE proteins but only RhD-positive cells being able to express the RhD proteins. This allowed the isolation, by size exclusion chromatography (SEC), of soluble fractions containing the Rh complex, including the RhD protein or not, within SMALPs. The use a conformation-dependent anti-RhD antibody in immunoprecipitation studies performed on SEC fractions of SMALPs containing Rh proteins clearly demonstrated that the RhD protein, which was only present in SMALPs prepared from RhD-positive RBC ghosts, has preserved at least one important conformational RhD epitope. This approach opens new perspectives in the field of the erythroid membrane study, such as visualization of RBC membrane complexes in native conditions by cryo-electron microscopy (CryoEM) or immuno-tests with conformation-dependent antibodies against blood group antigens on separated and characterized SMALPs containing RBC membrane proteins.
中文翻译：
天然红细胞膜复合物的无洗涤剂分离。
在过去的几十年中，对红细胞（RBC）膜的研究引起了越来越复杂的，尽管结构结构不同的模型，因为研究通常是在使用洗涤剂的变性条件下进行的。为了保持可分离的RBC膜复合物的相互作用和构象，我们决定将最新的SMALP（苯乙烯马来酸脂质颗粒）技术应用于RBC幽灵。根据重悬膜重悬的缓冲液的离子强度，SMALPs中分离的蛋白质在考马斯染色凝胶上可能有所不同，但与重膜SDS裂解物相比变化不大。随后，我们生产了来自两种不同血型表型（RhD阳性和RhD阴性）的幽灵的SMALP，两种类型的RBC都表达RhCE蛋白，但只有RhD阳性细胞能够表达RhD蛋白。这允许通过尺寸排阻色谱法（SEC）分离SMALP中含有Rh复合物的可溶级分，包括或不包括RhD蛋白。在含有Rh蛋白的SMALP的SEC部分进行的免疫沉淀研究中，使用构象依赖性抗RhD抗体清楚地证明仅存在于从RhD阳性RBC幽灵制备的SMALP中的RhD蛋白已经保留了至少一种重要的构象。 RhD表位。这种方法为类红细胞膜研究领域开辟了新的前景，
更新日期：2019-11-16
中文翻译：
天然红细胞膜复合物的无洗涤剂分离。
在过去的几十年中，对红细胞（RBC）膜的研究引起了越来越复杂的，尽管结构结构不同的模型，因为研究通常是在使用洗涤剂的变性条件下进行的。为了保持可分离的RBC膜复合物的相互作用和构象，我们决定将最新的SMALP（苯乙烯马来酸脂质颗粒）技术应用于RBC幽灵。根据重悬膜重悬的缓冲液的离子强度，SMALPs中分离的蛋白质在考马斯染色凝胶上可能有所不同，但与重膜SDS裂解物相比变化不大。随后，我们生产了来自两种不同血型表型（RhD阳性和RhD阴性）的幽灵的SMALP，两种类型的RBC都表达RhCE蛋白，但只有RhD阳性细胞能够表达RhD蛋白。这允许通过尺寸排阻色谱法（SEC）分离SMALP中含有Rh复合物的可溶级分，包括或不包括RhD蛋白。在含有Rh蛋白的SMALP的SEC部分进行的免疫沉淀研究中，使用构象依赖性抗RhD抗体清楚地证明仅存在于从RhD阳性RBC幽灵制备的SMALP中的RhD蛋白已经保留了至少一种重要的构象。 RhD表位。这种方法为类红细胞膜研究领域开辟了新的前景，
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