The serine protease inhibitor, plasminogen activator inhibitor Type-1 (PAI-1) is a metastable protein that undergoes an unusual transition to an inactive conformation with a short half-life of only 1-2 hr. Circulating PAI-1 is bound to a cofactor vitronectin, which stabilizes PAI-1 by slowing this latency conversion. A well-characterized PAI-1-binding site on vitronectin is located within the somatomedin B (SMB) domain, corresponding to the first 44 residues of the protein. Another PAI-1 recognition site has been identified with an engineered form of vitronectin lacking the SMB domain, yet retaining PAI-1 binding capacity (Schar, Blouse, Minor, Peterson. J Biol Chem. 2008;283:28487-28496). This additional binding site is hypothesized to lie within an intrinsically disordered domain (IDD) of vitronectin. To localize the putative binding site, we constructed a truncated form of vitronectin containing 71 amino acids from the N-terminus, including the SMB domain and an additional 24 amino acids from the IDD region. This portion of the IDD is rich in acidic amino acids, which are hypothesized to be complementary to several basic residues identified within an extensive vitronectin-binding site mapped on PAI-1 (Schar, Jensen, Christensen, Blouse, Andreasen, Peterson. J Biol Chem. 2008;283:10297-10309). Steady-state and stopped-flow fluorescence measurements demonstrate that the truncated form of vitronectin exhibits the same rapid biphasic association as full-length vitronectin and that the IDD hosts the elusive second PAI-1 binding site that lies external to the SMB domain of vitronectin.

中文翻译：

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在玻连蛋白的内在无序区域内的PAI-1结合位点的鉴定。

丝氨酸蛋白酶抑制剂纤溶酶原激活物抑制剂1型（PAI-1）是一种亚稳态蛋白，它经历了异常转变为非活性构象，半衰期仅为1-2小时。循环的PAI-1与辅因子玻连蛋白结合，辅因子通过减慢这种潜伏期的转化来稳定PAI-1。在玻连蛋白上一个特征明确的PAI-1结合位点位于生长激素B（SMB）结构域内，与该蛋白的前44个残基相对应。已经鉴定了具有工程形式的缺乏SMB结构域但仍保留PAI-1结合能力的玻连蛋白的另一个PAI-1识别位点（Schar，Blouse，Minor，Peterson.J Biol Chem.2008； 283：28487-28496）。假设该额外的结合位点位于玻连蛋白的内在无序域（IDD）内。为了定位假定的结合位点，我们构建了截短的玻连蛋白形式，其中包含N端的71个氨基酸，包括SMB结构域和IDD区域的另外24个氨基酸。IDD的这一部分富含酸性氨基酸，据推测与在PAI-1上定位的广泛的玻连蛋白结合位点中鉴定出的几个基本残基互补（Schar，Jensen，Christensen，Blouse，Andreasen，Peterson。J Biol Chem.2008; 283：10297-10309）。稳态荧光和停止流动的荧光测量结果表明，玻连蛋白的截短形式与全长玻连蛋白表现出相同的快速双相缔合，并且IDD拥有位于玻连蛋白SMB域外部的难以捉摸的第二个PAI-1结合位点。包括SMB域和IDD区域的另外24个氨基酸。IDD的这一部分富含酸性氨基酸，据推测与在PAI-1上定位的广泛的玻连蛋白结合位点中鉴定出的几个基本残基互补（Schar，Jensen，Christensen，Blouse，Andreasen，Peterson。J Biol Chem.2008; 283：10297-10309）。稳态和停止流动的荧光测量结果表明，玻连蛋白的截短形式与全长玻连蛋白表现出相同的快速双相缔合，并且IDD拥有位于玻连蛋白SMB域外部的难以捉摸的第二个PAI-1结合位点。包括SMB域和IDD区域的另外24个氨基酸。IDD的这一部分富含酸性氨基酸，据推测与在PAI-1上定位的广泛的玻连蛋白结合位点中鉴定出的几个基本残基互补（Schar，Jensen，Christensen，Blouse，Andreasen，Peterson。J Biol Chem.2008; 283：10297-10309）。稳态和停止流动的荧光测量结果表明，玻连蛋白的截短形式与全长玻连蛋白表现出相同的快速双相缔合，并且IDD拥有位于玻连蛋白SMB域外部的难以捉摸的第二个PAI-1结合位点。它们被认为与定位在PAI-1上的广泛的玻连蛋白结合位点中鉴定的几个基本残基互补（Schar，Jensen，Christensen，Blouse，Andreasen，Peterson.J Biol Chem.2008； 283：10297-10309）。稳态和停流荧光测量结果表明，玻连蛋白的截短形式表现出与全长玻连蛋白相同的快速双相缔合，并且IDD拥有位于玻连蛋白SMB域外部的难以捉摸的第二个PAI-1结合位点。它们被认为与定位在PAI-1上的广泛的玻连蛋白结合位点中鉴定的几个基本残基互补（Schar，Jensen，Christensen，Blouse，Andreasen，Peterson.J Biol Chem.2008； 283：10297-10309）。稳态和停止流动的荧光测量结果表明，玻连蛋白的截短形式与全长玻连蛋白表现出相同的快速双相缔合，并且IDD拥有位于玻连蛋白SMB域外部的难以捉摸的第二个PAI-1结合位点。