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Characterization of PHB in the gonadal development of the swimming crab Portunus trituberculatus.
Comparative Biochemistry and Physiology B: Biochemistry & Molecular Biology ( IF 1.9 ) Pub Date : 2019-10-17 , DOI: 10.1016/j.cbpb.2019.110338 Xueni Qiu 1 , Hua Yang 1 , Zhiming Ren 1 , Shengming Han 2 , Changkao Mu 2 , Ronghua Li 2 , Yangfang Ye 2 , Weiwei Song 2 , Ce Shi 2 , Lei Liu 2 , Huan Wang 2 , Chunlin Wang 2
Comparative Biochemistry and Physiology B: Biochemistry & Molecular Biology ( IF 1.9 ) Pub Date : 2019-10-17 , DOI: 10.1016/j.cbpb.2019.110338 Xueni Qiu 1 , Hua Yang 1 , Zhiming Ren 1 , Shengming Han 2 , Changkao Mu 2 , Ronghua Li 2 , Yangfang Ye 2 , Weiwei Song 2 , Ce Shi 2 , Lei Liu 2 , Huan Wang 2 , Chunlin Wang 2
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Prohibitin (PHB) is an evolutionarily conserved multifunctional protein with ubiquitous expression. In this study, we cloned the PHB gene from the testis of the swimming crab Portunus trituberculatus (PtPHB) and analyzed the deduced amino acid sequence. The expression level of phb mRNA in larvae was analyzed using qRT-PCR. The expression level of phb mRNA and PHB protein in different tissues were analyzed using qRT-PCR and Western blot respectively. Enzyme-linked immunosorbent assay analyses of the PHB protein were conducted with the testis and ovaries from P. trituberculatus specimens at different developmental stages. PHB was localized with mitochondria and ubiquitin in the testis and ovaries. The PtPHB gene was found to contain an open reading frame of 825 bp, encoding a predicted peptide with 275 amino acids, sharing between 65.9% and 96.7% similarity with that of other species. The qRT-PCR and Western blot results showed that the phb gene and PHB protein both expressed less in the testis and ovary than in other tissues, and the phb gene presented the lowest expression in the Z1 stage. Furthermore, the phb gene and PHB protein expression were different in the testis and ovaries at different developmental stages. PHB was mainly found to be co-localized with mitochondria and ubiquitin in cytoplasm and acrosome complex during spermatogenesis and in follicular cells during oogenesis. Interestingly, PHB-mitochondria signals and ubiquitin signal were also found in oocytes. These results indicated that PHB might play important roles during spermatogenesis and oogenesis by regulating mitochondrial activities.
中文翻译：
PHB在游泳蟹Portunus trituberculatus性腺发育中的特征。
抑制素（PHB）是一种在进化上保守的多功能蛋白，其表达无处不在。在这项研究中，我们从游泳蟹三疣梭子蟹（PtPHB）的睾丸中克隆了PHB基因，并分析了推导的氨基酸序列。使用qRT-PCR分析幼虫中phb mRNA的表达水平。分别采用qRT-PCR和Western blot检测不同组织中phb mRNA和PHB蛋白的表达水平。对PHB蛋白的酶联免疫吸附测定分析是在不同发育阶段用来自三疣梭子蟹标本的睾丸和卵巢进行的。PHB局部存在于睾丸和卵巢中的线粒体和泛素中。发现PtPHB基因含有825 bp的开放阅读框，编码具有275个氨基酸的预测肽，共有65.9％至96个氨基酸。与其他物种的相似度为7％。qRT-PCR和Western blot结果表明，phb基因和PHB蛋白在睾丸和卵巢中的表达均低于其他组织，而phb基因在Z1期的表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。qRT-PCR和Western blot结果表明，phb基因和PHB蛋白在睾丸和卵巢中的表达均低于其他组织，而phb基因在Z1期的表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。qRT-PCR和Western blot结果表明，phb基因和PHB蛋白在睾丸和卵巢中的表达均低于其他组织，而phb基因在Z1期的表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。phb基因在Z1期表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。phb基因在Z1期表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。
更新日期：2019-10-17
中文翻译：
PHB在游泳蟹Portunus trituberculatus性腺发育中的特征。
抑制素（PHB）是一种在进化上保守的多功能蛋白，其表达无处不在。在这项研究中，我们从游泳蟹三疣梭子蟹（PtPHB）的睾丸中克隆了PHB基因，并分析了推导的氨基酸序列。使用qRT-PCR分析幼虫中phb mRNA的表达水平。分别采用qRT-PCR和Western blot检测不同组织中phb mRNA和PHB蛋白的表达水平。对PHB蛋白的酶联免疫吸附测定分析是在不同发育阶段用来自三疣梭子蟹标本的睾丸和卵巢进行的。PHB局部存在于睾丸和卵巢中的线粒体和泛素中。发现PtPHB基因含有825 bp的开放阅读框，编码具有275个氨基酸的预测肽，共有65.9％至96个氨基酸。与其他物种的相似度为7％。qRT-PCR和Western blot结果表明，phb基因和PHB蛋白在睾丸和卵巢中的表达均低于其他组织，而phb基因在Z1期的表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。qRT-PCR和Western blot结果表明，phb基因和PHB蛋白在睾丸和卵巢中的表达均低于其他组织，而phb基因在Z1期的表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。qRT-PCR和Western blot结果表明，phb基因和PHB蛋白在睾丸和卵巢中的表达均低于其他组织，而phb基因在Z1期的表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。phb基因在Z1期表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。phb基因在Z1期表达最低。此外，在不同发育阶段，睾丸和卵巢中的phb基因和PHB蛋白表达也不同。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵子发生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。在精子发生过程中，PHB主要与线粒体和泛素共定位于细胞质和顶体复合物中，卵生过程中与卵泡细胞共定位。有趣的是，在卵母细胞中也发现了PHB线粒体信号和泛素信号。这些结果表明，PHB可能通过调节线粒体活性在精子发生和卵子发生过程中发挥重要作用。
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