The Pig-a assay detects the expression of the endogenous phosphatidylinositol glycan anchor biosynthesis, class A gene (Pig-a) as a reporter of mutations and shows promise for detecting mutations in vivo. This assay requires two to four weeks to detect mutations in erythrocytes after animals are administered a single dose of test compound. In contrast, the more recently developed PIGRET assay using reticulocytes detects mutation sensitively one week after dosing, which is an advantage for conducting short-term genotoxicity studies in vivo. As part of the Japanese Environmental Mutagen Society/Mammalian Mutagenicity Study Group collaborative study, we conducted Pig-a and PIGRET assays to detect Pig-a mutations in rats treated with etoposide. The DNA topoisomerase II-inhibitor, etoposide, causes DNA cleavage and subsequent protein-linked DNA double-strand breaks, induces chromosomal aberrations and micronuclei, and is classified as 2A (probably carcinogenic to humans) by IARC. Etoposide was intravenously given once to 7-week old SD rats at doses of 0, 5, 10, and 20mg/kg. Severe myelosuppression was induced 2days after dosing in all dosing groups. We conducted Pig-a mutant analysis in Pig-a and PIGRET assays 1, 2, and 4 weeks after dosing. Neither Pig-a nor PIGRET assays showed any statistically significant increases in Pig-a mutant frequency in any of the dose groups at any of the sampling times. It was concluded that etoposide was judged negative in Pig-a and PIGRET assays of bone marrow cells, and the results of the two assays showed hardly any differences.

中文翻译：

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使用 Pig-a 和 PIGRET 检测评估依托泊苷的体内基因突变。

Pig-a 检测可检测内源性磷脂酰肌醇聚糖锚定生物合成 A 类基因 (Pig-a) 作为突变报告基因的表达，并有望在体内检测突变。在动物被给予单剂量的测试化合物后，该测定需要两到四个星期来检测红细胞中的突变。相比之下，最近开发的使用网织红细胞的 PIGRET 检测可在给药后一周灵敏地检测突变，这是进行体内短期遗传毒性研究的一个优势。作为日本环境诱变剂协会/哺乳动物致突变性研究小组合作研究的一部分，我们进行了 Pig-a 和 PIGRET 检测，以检测用依托泊苷治疗的大鼠的 Pig-a 突变。DNA 拓扑异构酶 II 抑制剂，依托泊苷，导致 DNA 裂解和随后的蛋白质连接 DNA 双链断裂，诱导染色体畸变和微核，被 IARC 归类为 2A（可能对人类致癌）。依托泊苷以 0、5、10 和 20mg/kg 的剂量向 7 周龄 SD 大鼠静脉注射一次。所有给药组在给药后2天诱导严重骨髓抑制。我们在给药后 1、2 和 4 周在 Pig-a 和 PIGRET 测定中进行了 Pig-a 突变体分析。在任何采样时间，Pig-a 和 PIGRET 测定均未显示任何剂量组中 Pig-a 突变频率的任何统计学显着增加。结论是依托泊苷在骨髓细胞的Pig-a和PIGRET测定中被判断为阴性，并且两种测定的结果几乎没有显示出任何差异。并被 IARC 列为 2A（可能对人类致癌）。依托泊苷以 0、5、10 和 20mg/kg 的剂量向 7 周龄 SD 大鼠静脉注射一次。所有给药组在给药后2天诱导严重骨髓抑制。我们在给药后 1、2 和 4 周在 Pig-a 和 PIGRET 测定中进行了 Pig-a 突变体分析。在任何采样时间，Pig-a 和 PIGRET 测定均未显示任何剂量组中 Pig-a 突变频率的任何统计学显着增加。结论是依托泊苷在骨髓细胞的Pig-a和PIGRET测定中被判断为阴性，并且两种测定的结果几乎没有显示出任何差异。并被 IARC 列为 2A（可能对人类致癌）。依托泊苷以 0、5、10 和 20mg/kg 的剂量向 7 周龄 SD 大鼠静脉注射一次。所有给药组在给药后2天诱导严重骨髓抑制。我们在给药后 1、2 和 4 周在 Pig-a 和 PIGRET 测定中进行了 Pig-a 突变体分析。在任何采样时间，Pig-a 和 PIGRET 测定均未显示任何剂量组中 Pig-a 突变频率的任何统计学显着增加。结论是依托泊苷在骨髓细胞的Pig-a和PIGRET测定中被判断为阴性，并且两种测定的结果几乎没有显示出任何差异。所有给药组在给药后2天诱导严重骨髓抑制。我们在给药后 1、2 和 4 周在 Pig-a 和 PIGRET 测定中进行了 Pig-a 突变体分析。在任何采样时间，Pig-a 和 PIGRET 测定均未显示任何剂量组中 Pig-a 突变频率的任何统计学显着增加。结论是依托泊苷在骨髓细胞的Pig-a和PIGRET测定中被判断为阴性，并且两种测定的结果几乎没有显示出任何差异。所有给药组在给药后2天诱导严重骨髓抑制。我们在给药后 1、2 和 4 周在 Pig-a 和 PIGRET 测定中进行了 Pig-a 突变体分析。在任何采样时间，Pig-a 和 PIGRET 测定均未显示任何剂量组中 Pig-a 突变频率的任何统计学显着增加。结论是依托泊苷在骨髓细胞的Pig-a和PIGRET测定中被判断为阴性，并且两种测定的结果几乎没有显示出任何差异。