Oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) is a type of modified cholesterol that promotes apoptosis and inflammation and advances the progression of heart failure. Leucine-zipper and sterile-α motif kinase (ZAK) is a kinase of the MAP3K family which is highly expressed in the heart and encodes two variants, ZAKα and ZAKβ. Our previous study serendipitously found opposite effects of ZAKα and ZAKβ in which ZAKβ antagonizes ZAKα-induced apoptosis and hypertrophy of the heart. This study aims to test the hypothesis of whether ZAKα and ZAKβ are involved in the damaging effects of ox-LDL in the cardiomyoblast. Cardiomyoblast cells H9c2 were treated with different concentrations of ox-LDL. Cell viability and apoptosis were measured by MTT and TUNEL assay, respectively. Western blot was used to detect apoptosis, hypertrophy, and pro-survival signaling proteins. Plasmid transfection, pharmacological inhibition with D2825, and siRNA transfection were utilized to upregulate or downregulate ZAKβ, respectively. Ox-LDL concentration-dependently reduces the viability and expression of several pro-survival proteins, such as phospho-PI3K, phospho-Akt, and Bcl-xL. Furthermore, ox-LDL increases cleaved caspase-3, cleaved caspase-9 as indicators of apoptosis and increases B-type natriuretic peptide (BNP) as an indicator of hypertrophy. Overexpression of ZAKβ by plasmid transfection attenuates apoptosis and prevents upregulation of BNP. Importantly, these effects were abolished by inhibiting ZAKβ either by D2825 or siZAKβ application. Our results suggest that ZAKβ upregulation in response to ox-LDL treatment confers protective effects on cardiomyoblast.

氧化低密度脂蛋白 (ox-LDL) 是一种经修饰的胆固醇，可促进细胞凋亡和炎症，并促进心力衰竭的进展。亮氨酸拉链和不育α基序激酶 (ZAK) 是 MAP3K 家族的激酶，在心脏中高度表达并编码两种变体 ZAKα 和 ZAKβ。我们之前的研究偶然发现了 ZAKα 和 ZAKβ 的相反作用，其中 ZAKβ 拮抗 ZAKα 诱导的细胞凋亡和心脏肥大。本研究旨在检验 ZAKα 和 ZAKβ 是否参与 ox-LDL 在心肌细胞中的破坏作用的假设。用不同浓度的ox-LDL处理心肌细胞H9c2。分别通过 MTT 和 TUNEL 测定法测量细胞活力和细胞凋亡。Western印迹用于检测细胞凋亡、肥大、和促生存信号蛋白。质粒转染、D2825 药理抑制和 siRNA 转染分别用于上调或下调 ZAKβ。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。D2825的药理抑制作用和siRNA转染分别用于上调或下调ZAKβ。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。D2825的药理抑制作用和siRNA转染分别用于上调或下调ZAKβ。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。和 siRNA 转染分别用于上调或下调 ZAKβ。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。和 siRNA 转染分别用于上调或下调 ZAKβ。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。Ox-LDL 浓度依赖性地降低几种促生存蛋白的活力和表达，例如 phospho-PI3K、phospho-Akt 和 Bcl-xL。此外，ox-LDL 增加裂解的 caspase-3、裂解的 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。切割 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。切割 caspase-9 作为细胞凋亡的指标，并增加 B 型利钠肽 (BNP) 作为肥大的指标。通过质粒转染过表达 ZAKβ 会减弱细胞凋亡并防止 BNP 上调。重要的是，通过 D2825 或 siZAKβ 应用抑制 ZAKβ 消除了这些影响。我们的结果表明，响应于 ox-LDL 治疗的 ZAKβ 上调对心肌细胞具有保护作用。