Previous study found 1-NP disrupted steroidogenesis in mouse testis, but the underlying mechanism remained elusive. The current work aims to explore the roles of ROS-promoted AKAP1 degradation and excessive mitochondrial fission in 1-NP-induced steroidogenesis disruption in MLTC-1 cells. Transmission electron microscope analysis found 1-NP promoted excessive mitochondrial fission. Further data showed 1-NP disrupted mitochondrial function. pDRP1 (Ser637), a negative regulator of mitochondrial fission, was reduced in 1-NP-treated MLTC-1 cells. Mechanistically, 1-NP caused degradation of AKAP1, an upstream regulator of pDRP1 (Ser637). MG132, a proteasome inhibitor, attenuated 1-NP-induced AKAP1 degradation and downstream pDRP1 (Ser637) reduction, thereby ameliorating 1-NP-downregulated steroidogenesis. Further analysis found that cellular ROS was elevated and NOX4, HO-1 and SOD2 were upregulated in 1-NP-exposed MLTC-1 cells. NAC, a well-known commercial antioxidant, alleviated 1-NP-induced excessive ROS and oxidative stress. 1-NP-induced AKAP1 degradation and subsequent downregulation of pDRP1 (Ser637) were prevented by NAC pretreatment. Moreover, NAC attenuated 1-NP-resulted T synthesis disturbance in MLTC-1 cells. The present study indicates that ROS mediated AKAP1 degradation and subsequent pDRP1 (Ser637) dependent mitochondrial fission is indispensable in 1-NP caused T synthesis disruption. This study provides a new insight into 1-NP-induced endocrine disruption, and offers theoretical basis in public health prevention.

先前的研究发现 1-NP 破坏了小鼠睾丸中的类固醇生成，但其潜在机制仍然难以捉摸。目前的工作旨在探索 ROS 促进的 AKAP1 降解和线粒体过度分裂在 1-NP 诱导的 MLTC-1 细胞类固醇生成破坏中的作用。透射电镜分析发现 1-NP 促进了线粒体的过度分裂。进一步的数据显示 1-NP 破坏了线粒体功能。pDRP1 (Ser637) 是线粒体裂变的负调节因子，在 1-NP 处理的 MLTC-1 细胞中减少。从机制上讲，1-NP 导致 AKAP1 降解，AKAP1 是 pDRP1 (Ser637) 的上游调节剂。MG132 是一种蛋白酶体抑制剂，可减弱 1-NP 诱导的 AKAP1 降解和下游 pDRP1 (Ser637) 减少，从而改善 1-NP 下调的类固醇生成。进一步分析发现，在暴露于 1-NP 的 MLTC-1 细胞中，细胞 ROS 升高，NOX4、HO-1 和 SOD2 上调。NAC 是一种著名的商业抗氧化剂，可缓解 1-NP 诱导的过量 ROS 和氧化应激。NAC 预处理可防止 1-NP 诱导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 下调。此外，NAC 减弱了 MLTC-1 细胞中 1-NP 导致的 T 合成障碍。本研究表明 ROS 介导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 依赖性线粒体裂变在 1-NP 引起的 T 合成中断中是必不可少的。该研究为1-NP诱导的内分泌干扰提供了新的见解，并为公共卫生预防提供了理论依据。减轻1-NP诱导的过量ROS和氧化应激。NAC 预处理可防止 1-NP 诱导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 下调。此外，NAC 减弱了 MLTC-1 细胞中 1-NP 导致的 T 合成障碍。本研究表明 ROS 介导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 依赖性线粒体裂变在 1-NP 引起的 T 合成中断中是必不可少的。该研究为1-NP诱导的内分泌干扰提供了新的见解，并为公共卫生预防提供了理论依据。减轻1-NP诱导的过量ROS和氧化应激。NAC 预处理可防止 1-NP 诱导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 下调。此外，NAC 减弱了 MLTC-1 细胞中 1-NP 导致的 T 合成障碍。本研究表明 ROS 介导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 依赖性线粒体裂变在 1-NP 引起的 T 合成中断中是必不可少的。该研究为1-NP诱导的内分泌干扰提供了新的见解，并为公共卫生预防提供了理论依据。本研究表明 ROS 介导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 依赖性线粒体裂变在 1-NP 引起的 T 合成中断中是必不可少的。该研究为1-NP诱导的内分泌干扰提供了新的见解，并为公共卫生预防提供了理论依据。本研究表明 ROS 介导的 AKAP1 降解和随后的 pDRP1 (Ser637) 依赖性线粒体裂变在 1-NP 引起的 T 合成中断中是必不可少的。该研究为1-NP诱导的内分泌干扰提供了新的见解，并为公共卫生预防提供了理论依据。