HIV-specific chimeric antigen receptor (CAR) T cells have been developed to target latently infected CD4+ T cells that express virus either spontaneously or after intentional latency reversal. However, the T-cell exhaustion and the patient-specific autologous paradigm of CAR-T hurdled the clinical application. Here, we created HIV-specific CAR-T cells using human peripheral blood mononuclear cells and a 3BNC117-E27 CAR (3BE CAR) construct that enables the expression of PD-1 blocking scFv E27 and the single-chain variable fragment of the HIV-1-specific broadly neutralizing antibody 3BNC117 to target native HIV envelope glycoprotein (Env). In comparison with T cells expressing 3BNC117-CAR alone, 3BE CAR-T cells showed greater anti-HIV potency with stronger proliferation capability, higher killing efficiency (up to ~75%) and enhanced cytokine secretion in the presence of HIV envelope glycoprotein-expressing cells. Furthermore, our approach achieved high levels (over 97%) of the TCR-deficient 3BE CAR-T cells with the functional inactivation of endogenous TCR to avoid graft-versus-host disease without compromising their antiviral activity relative to standard anti-HIV CAR-T cells. These data suggest that we have provided a feasible approach to large-scale generation of “off-the-shelf” anti-HIV CAR-T cells in combination with antibody therapy of PD-1 blockade, which can be a powerful therapeutic candidate for the functional cure of HIV.

中文翻译：

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分泌PD-1阻断scFv的同种异体基因编辑的HIV特异性CAR-T细胞增强体外抗HIV活性

HIV 特异性嵌合抗原受体 (CAR) T 细胞已被开发用于靶向潜伏感染的 CD4+ T 细胞，这些细胞可以自发或有意逆转潜伏期后表达病毒。然而，CAR-T 的 T 细胞耗竭和患者特异性自体范式阻碍了临床应用。在这里，我们使用人外周血单核细胞和 3BNC117-E27 CAR (3BE CAR) 构建体创建了 HIV 特异性 CAR-T 细胞，该构建体能够表达 PD-1 阻断 scFv E27 和 HIV-的单链可变片段。 1 特异性广泛中和抗体 3BNC117，以靶向天然 HIV 包膜糖蛋白 (Env)。与单独表达 3BNC117-CAR 的 T 细胞相比，3BE CAR-T 细胞表现出更强的抗 HIV 效力和更强的增殖能力，在 HIV 包膜糖蛋白表达细胞存在的情况下，具有更高的杀伤效率（高达 ~75%）和增强的细胞因子分泌。此外，我们的方法实现了高水平（超过 97%）的 TCR 缺陷型 3BE CAR-T 细胞，同时内源性 TCR 的功能失活以避免移植物抗宿主病，而不会影响其相对于标准抗 HIV CAR-的抗病毒活性。 T细胞。这些数据表明，我们提供了一种可行的方法来大规模生成“现成的”抗 HIV CAR-T 细胞，并结合 PD-1 阻断的抗体疗法，这可能是一种强有力的治疗候选者。 HIV的功能性治愈。我们的方法实现了高水平（超过 97%）的 TCR 缺陷型 3BE CAR-T 细胞与内源性 TCR 的功能失活，以避免移植物抗宿主病，而不影响其相对于标准抗 HIV CAR-T 细胞的抗病毒活性. 这些数据表明，我们提供了一种可行的方法来大规模生成“现成的”抗 HIV CAR-T 细胞，并结合 PD-1 阻断的抗体疗法，这可能是一种强有力的治疗候选者。 HIV的功能性治愈。我们的方法实现了高水平（超过 97%）的 TCR 缺陷型 3BE CAR-T 细胞与内源性 TCR 的功能失活，以避免移植物抗宿主病，而不影响其相对于标准抗 HIV CAR-T 细胞的抗病毒活性. 这些数据表明，我们提供了一种可行的方法来大规模生成“现成的”抗 HIV CAR-T 细胞，并结合 PD-1 阻断的抗体疗法，这可能是一种强有力的治疗候选者。 HIV的功能性治愈。