The generation of lymphoid tissues during embryogenesis relies on group 3 innate lymphoid cells (ILC3) displaying lymphoid tissue inducer (LTi) activity and expressing the master transcription factor RORγt. Accordingly, RORγt-deficient mice lack ILC3 and lymphoid structures, including lymph nodes (LN). Whereas T-bet affects differentiation and functions of ILC3 postnatally, the role of T-bet in regulating fetal ILC3 and LN formation remains completely unknown. Using multiple mouse models and single-cell analyses of fetal ILCs and ILC progenitors (ILCP), here we identify a key role for T-bet during embryogenesis and show that its deficiency rescues LN formation in RORγt-deficient mice. Mechanistically, T-bet deletion skews the differentiation fate of fetal ILCs and promotes the accumulation of PLZF^hi ILCP expressing central LTi molecules in a RORα-dependent fashion. Our data unveil an unexpected role for T-bet and RORα during embryonic ILC function and highlight that RORγt is crucial in counteracting the suppressive effects of T-bet.

胚胎发生过程中淋巴组织的生成依赖于表现出淋巴组织诱导物 (LTi) 活性并表达主转录因子 RORγt 的第 3 组先天淋巴细胞 (ILC3)。因此，RORγt 缺陷小鼠缺乏 ILC3 和淋巴结构，包括淋巴结 (LN)。尽管 T-bet 影响出生后 ILC3 的分化和功能，但 T-bet 在调节胎儿 ILC3 和 LN 形成中的作用仍然完全未知。通过使用多个小鼠模型以及对胎儿 ILC 和 ILC 祖细胞 (ILCP) 的单细胞分析，我们确定了 T-bet 在胚胎发生过程中的关键作用，并表明它的缺陷可以挽救 RORγt 缺陷小鼠中的 LN 形成。从机制上讲，T-bet 缺失会扭曲胎儿 ILC 的分化命运，并以 RORα 依赖性方式促进表达中央 LTi 分子的 PLZF ^hi ILCP的积累。我们的数据揭示了 T-bet 和 RORα 在胚胎 ILC 功能中的意想不到的作用，并强调 RORγt 在抵消 T-bet 的抑制作用中至关重要。