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Binding Characteristic of Various Antibody Formats Against Aflatoxins
ACS Omega ( IF 3.7 ) Pub Date : 2021-09-23 , DOI: 10.1021/acsomega.1c03044 Kuntalee Rangnoi 1 , Florian Rüker 2 , Gordana Wozniak-Knopp 2 , Barbara Cvak 3 , Richard O'Kennedy 4 , Montarop Yamabhai 1
ACS Omega ( IF 3.7 ) Pub Date : 2021-09-23 , DOI: 10.1021/acsomega.1c03044 Kuntalee Rangnoi 1 , Florian Rüker 2 , Gordana Wozniak-Knopp 2 , Barbara Cvak 3 , Richard O'Kennedy 4 , Montarop Yamabhai 1
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The application of recombinant antibodies for the analysis of foods and food contaminants is now a major focus, given their capacity to be engineered to tailor their specificity, enhance their stability, and modify their structural formats to fit the desired analytical platform. In this study, human scFv antibody fragments generated against aflatoxin B1 (AFB1) were selected as the model antibody to explore the effect of antibody formats on their binding activity and to evaluate their potential use as immunoreagents for food contaminant analysis. Four human scFv antibody fragments against aflatoxin B1 (AFB1), previously isolated and engineered by chain shuffling, were converted into various formats, that is, scFv-AP fusions, scFv-Fc, and whole IgG molecules. The result indicated that the effects of the antibody format on the binding property varied, depending on the sequence of scFv. For all of the scFv clones, the scFv-AP fusion format showed the highest sensitivity by competitive ELISA, while the effects on the binding activity after conversion to scFv-Fc or IgG format varied, depending on the amino acid sequence of the antibodies. The sAFH-3e3 antibodies that showed the best performance by competitive ELISA were selected for further investigation. The sAFH-3e3 was converted to the scFv-GFP format and tested by fluorescence-linked immunosorbent assay (FLISA), which showed that its binding property was equivalent to those of scFv-Fc and IgG formats. The potential applications of the sAFH-3e3 in a rapid test kit format based on ELISA (scFv-AP) and in a lateral flow immunochromatography assay (LFIA) (IgG) were demonstrated. A comparison of methods for the extraction of AFB1 from matrices for use with these assay formats indicated that PBS and TBST are better than 70% methanol.
中文翻译：
各种抗体形式抗黄曲霉毒素的结合特性
重组抗体在食品和食品污染物分析中的应用现在是一个主要焦点，因为它们能够被设计来定制其特异性、增强其稳定性并修改其结构形式以适应所需的分析平台。在本研究中，选择针对黄曲霉毒素 B1 (AFB1) 产生的人 scFv 抗体片段作为模型抗体，以探讨抗体形式对其结合活性的影响，并评估其作为食品污染物分析免疫试剂的潜在用途。先前通过链改组分离和改造的四种抗黄曲霉毒素 B1 (AFB1) 的人 scFv 抗体片段被转化为各种形式，即 scFv-AP 融合物、scFv-Fc 和完整 IgG 分子。结果表明，抗体形式对结合特性的影响有所不同，具体取决于 scFv 的序列。对于所有 scFv 克隆，通过竞争性 ELISA，scFv-AP 融合形式显示出最高的灵敏度，而转换为 scFv-Fc 或 IgG 形式后对结合活性的影响有所不同，具体取决于抗体的氨基酸序列。选择通过竞争性 ELISA 显示出最佳性能的 sAFH-3e3 抗体进行进一步研究。将sAFH-3e3转化为scFv-GFP格式并通过荧光联免疫吸附测定（FLISA）进行测试，结果表明其结合特性与scFv-Fc和IgG格式相当。 sAFH-3e3 在基于 ELISA (scFv-AP) 的快速检测试剂盒形式和侧流免疫层析测定 (LFIA) (IgG) 中的潜在应用得到了证明。 从基质中提取 AFB1 的方法与这些测定形式一起使用的比较表明，PBS 和 TBST 优于 70% 甲醇。
更新日期：2021-10-06
中文翻译：
各种抗体形式抗黄曲霉毒素的结合特性
重组抗体在食品和食品污染物分析中的应用现在是一个主要焦点，因为它们能够被设计来定制其特异性、增强其稳定性并修改其结构形式以适应所需的分析平台。在本研究中，选择针对黄曲霉毒素 B1 (AFB1) 产生的人 scFv 抗体片段作为模型抗体，以探讨抗体形式对其结合活性的影响，并评估其作为食品污染物分析免疫试剂的潜在用途。先前通过链改组分离和改造的四种抗黄曲霉毒素 B1 (AFB1) 的人 scFv 抗体片段被转化为各种形式，即 scFv-AP 融合物、scFv-Fc 和完整 IgG 分子。结果表明，抗体形式对结合特性的影响有所不同，具体取决于 scFv 的序列。对于所有 scFv 克隆，通过竞争性 ELISA，scFv-AP 融合形式显示出最高的灵敏度，而转换为 scFv-Fc 或 IgG 形式后对结合活性的影响有所不同，具体取决于抗体的氨基酸序列。选择通过竞争性 ELISA 显示出最佳性能的 sAFH-3e3 抗体进行进一步研究。将sAFH-3e3转化为scFv-GFP格式并通过荧光联免疫吸附测定（FLISA）进行测试，结果表明其结合特性与scFv-Fc和IgG格式相当。 sAFH-3e3 在基于 ELISA (scFv-AP) 的快速检测试剂盒形式和侧流免疫层析测定 (LFIA) (IgG) 中的潜在应用得到了证明。 从基质中提取 AFB1 的方法与这些测定形式一起使用的比较表明，PBS 和 TBST 优于 70% 甲醇。
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