Cancer stem cells (CSCs) are key regulators in the processes of tumor initiation, progression, and recurrence. The mechanism that maintains their stemness remains enigmatic, although the role of several long noncoding RNAs (lncRNAs) has been highlighted in the pancreatic cancer stem cells (PCSCs). In this study, we first established that PCSCs overexpressing lncRNA NORAD, and then investigated the effects of NORAD on the maintenance of PCSC stemness. Expression of lncRNA NORAD, miR-202-5p and ANP32E in PC tissues and cell lines was quantified after RNA isolation. Dual-luciferase reporter assay, RNA pull-down and RIP assays were performed to verify the interactions among NORAD, miR-202-5p and ANP32E. We then carried out gain- and loss-of function of miR-202-5p, ANP32E and NORAD in PANC-1 cell line, followed by measurement of the aldehyde dehydrogenase activity, cell viability, apoptosis, cell cycle distribution, colony formation, self-renewal ability and tumorigenicity of PC cells. LncRNA NORAD and ANP32E were upregulated in PC tissues and cells, whereas the miR-202-5p level was down-regulated. LncRNA NORAD competitively bound to miR-202-5p, and promoted the expression of the miR-202-5p target gene ANP32E thereby promoting PC cell viability, proliferation, and self-renewal ability in vitro, as well as facilitating tumorigenesis of PCSCs in vivo. Overall, lncRNA NORAD upregulates ANP32E expression by competitively binding to miR-202-5, which accelerates the proliferation and self-renewal of PCSCs.

中文翻译：

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长链非编码RNA NORAD通过阻断microRNA-202-5p介导的ANP32E抑制促进胰腺癌干细胞增殖和自我更新

癌症干细胞 (CSC) 是肿瘤发生、进展和复发过程中的关键调节因子。尽管几种长链非编码 RNA (lncRNA) 在胰腺癌干细胞 (PCSC) 中的作用已经得到强调，但维持其干细胞性的机制仍然是个谜。在本研究中，我们首先确定了过表达 lncRNA NORAD 的 PCSCs，然后研究了 NORAD 对 PCSC 干性维持的影响。在 RNA 分离后，定量 PC 组织和细胞系中 lncRNA NORAD、miR-202-5p 和 ANP32E 的表达。进行双荧光素酶报告基因测定、RNA pull-down 和 RIP 测定以验证 NORAD、miR-202-5p 和 ANP32E 之间的相互作用。然后我们在 PANC-1 细胞系中进行了 miR-202-5p、ANP32E 和 NORAD 的功能增益和丧失，随后测量PC细胞的醛脱氢酶活性、细胞活力、细胞凋亡、细胞周期分布、集落形成、自我更新能力和致瘤性。LncRNA NORAD 和 ANP32E 在 PC 组织和细胞中上调，而 miR-202-5p 水平下调。LncRNA NORAD 与 miR-202-5p 竞争性结合，促进 miR-202-5p 靶基因 ANP32E 的表达，从而促进体外 PC 细胞活力、增殖和自我更新能力，并促进 PCSCs 在体内的肿瘤发生. 总体而言，lncRNA NORAD 通过竞争性结合 miR-202-5 上调 ANP32E 表达，从而加速 PCSC 的增殖和自我更新。LncRNA NORAD 和 ANP32E 在 PC 组织和细胞中上调，而 miR-202-5p 水平下调。LncRNA NORAD 与 miR-202-5p 竞争性结合，促进 miR-202-5p 靶基因 ANP32E 的表达，从而促进体外 PC 细胞活力、增殖和自我更新能力，并促进 PCSCs 在体内的肿瘤发生. 总体而言，lncRNA NORAD 通过竞争性结合 miR-202-5 上调 ANP32E 表达，从而加速 PCSC 的增殖和自我更新。LncRNA NORAD 和 ANP32E 在 PC 组织和细胞中上调，而 miR-202-5p 水平下调。LncRNA NORAD 与 miR-202-5p 竞争性结合，促进 miR-202-5p 靶基因 ANP32E 的表达，从而促进体外 PC 细胞活力、增殖和自我更新能力，并促进 PCSCs 在体内的肿瘤发生. 总体而言，lncRNA NORAD 通过竞争性结合 miR-202-5 上调 ANP32E 表达，从而加速 PCSC 的增殖和自我更新。以及促进体内 PCSCs 的肿瘤发生。总体而言，lncRNA NORAD 通过竞争性结合 miR-202-5 上调 ANP32E 表达，从而加速 PCSC 的增殖和自我更新。以及促进体内 PCSCs 的肿瘤发生。总体而言，lncRNA NORAD 通过竞争性结合 miR-202-5 上调 ANP32E 表达，从而加速 PCSC 的增殖和自我更新。