Abstract

Asthma is a common respiratory disease which is characterized by persistent airway inflammation. Abnormal expression of long non-coding RNAs (lncRNAs) is observed in asthma. However, whether lncRNA nuclear-enriched abundant transcript 1 (NEAT1) regulates asthmatic inflammation and its mechanism still needs to be further investigated. The expression levels of inflammatory factors (tumour necrosis factor (TNF)-α, interleukin (IL)-4, IL-13, and IL-10) were detected using reverse transcription quantitative real-time PCR (RT-qPCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). MTT and flow cytometry assays were employed to determine cell proliferation and apoptosis, respectively. Dual luciferase reporter assay was performed to verify the relationship between miR-200a/b and MMP-16 or NEAT1. NEAT1 silencing markedly reduced TNF-α, IL-4, and IL-13 levels, while elevated IL-10 expression, suppressed cell proliferation, and promoted cell apoptosis. However, NEAT1 overexpression elicited the opposite effects on cell proliferation and inflammation cytokines secretion. What is more, NEAT1 negatively regulated miR-200a/b expression, and MMP16 was a target gene of miR-200a/b. miR-200a/b overexpression suppressed inflammation, cell proliferation, and enhanced cell apoptosis through regulation of MMP16. Moreover, MMP-16 overexpression or miR-200a/b inhibition abolished the regulatory effect of sh-NEAT1 on cell inflammation and apoptosis in BEAS-2B cells. NEAT1 acted as the role of sponge for miR-200a/b to regulate MMP-16 expression, thereby promoting asthma progression, suggesting that NEAT1 might have great potential as therapeutic target for asthma.

摘要

哮喘是一种常见的呼吸道疾病，以持续性气道炎症为特征。在哮喘中观察到长链非编码 RNA (lncRNA) 的异常表达。然而，lncRNA核富集的丰富转录物1（NEAT1）是否调节哮喘炎症及其机制仍有待进一步研究。使用逆转录定量实时 PCR (RT-qPCR) 和酶法检测炎症因子 (肿瘤坏死因子 (TNF)-α、白细胞介素 (IL)-4、IL-13 和 IL-10) 的表达水平。联免疫吸附试验（ELISA）。MTT和流式细胞术分别用于确定细胞增殖和凋亡。进行双荧光素酶报告基因测定以验证 miR-200a/b 和 MMP-16 或 NEAT1 之间的关系。NEAT1 沉默显着降低 TNF-α、IL-4 和 IL-13 水平，同时提高IL-10表达，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。然而，NEAT1 过表达对细胞增殖和炎症细胞因子分泌产生了相反的影响。更重要的是，NEAT1负调控miR-200a/b的表达，MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。然而，NEAT1 过表达对细胞增殖和炎症细胞因子分泌产生了相反的影响。更重要的是，NEAT1负调控miR-200a/b的表达，MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。然而，NEAT1 过表达对细胞增殖和炎症细胞因子分泌产生了相反的影响。更重要的是，NEAT1负调控miR-200a/b的表达，MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。NEAT1 过表达对细胞增殖和炎症细胞因子分泌产生相反的影响。更重要的是，NEAT1负调控miR-200a/b的表达，MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。NEAT1 过表达对细胞增殖和炎症细胞因子分泌产生相反的影响。更重要的是，NEAT1负调控miR-200a/b的表达，MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。MMP16是miR-200a/b的靶基因。miR-200a/b 过表达通过调节 MMP16 抑制炎症、细胞增殖和增强细胞凋亡。此外，MMP-16 过表达或 miR-200a/b 抑制消除了 sh-NEAT1 对 BEAS-2B 细胞炎症和细胞凋亡的调节作用。NEAT1 充当 miR-200a/b 海绵的作用，调节 MMP-16 表达，从而促进哮喘进展，表明 NEAT1 可能具有作为哮喘治疗靶点的巨大潜力。