Leishmaniasis is a neglected tropical disease that affects millions of people around the world. Larval excretion/secretion (ES) of the larvae of flies of the Calliphoridae family has microbicidal activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria, in addition to some species of Leishmania. Our study aimed at assessing the in vitro efficacy of Lucilia cuprina larval ES against the promastigote and amastigote forms of Leishmania amazonensis, elucidating possible microbicidal mechanisms and routes of death involved. Larval ES was able to inhibit the viability of L. amazonensis at all concentrations, induce morphological and ultrastructural changes in the parasite, retraction of the cell body, roughness of the cytoplasmic membrane, leakage of intracellular content, ROS production increase, induction of membrane depolarization and mitochondrial swelling, the formation of cytoplasmic lipid droplets and phosphatidylserine exposure, thus indicating the possibility of apoptosis-like death. To verify the efficacy of larval ES on amastigote forms, we performed a phagocytic assay, measurement of total ROS and NO. Treatment using larval ES reduced the percentage of infection and the number of amastigotes per macrophage of lineage J774A.1 at all concentrations, increasing the production of ROS and TNF-α, thus indicating possible pro-inflammatory immunomodulation and oxidative damage. Therefore, treatment using larval ES is effective at inducing the death of promastigotes and amastigotes of L. amazonensis even at low concentrations.

中文翻译：

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Lucilia cuprina 物种双翅目幼虫排泄/分泌导致亚马逊利什曼原虫的前鞭毛体和无鞭毛体死亡

利什曼病是一种被忽视的热带疾病，影响着全世界数百万人。除某些利什曼原虫外，Calliphoridae 苍蝇幼虫的幼虫排泄/分泌 (ES) 对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌具有杀微生物活性。我们的研究旨在评估 Lucilia cuprina 幼虫 ES 对亚马逊利什曼原虫的前鞭毛体和无鞭毛体形式的体外功效，阐明可能的杀微生物机制和所涉及的死亡途径。幼虫 ES 能够在所有浓度下抑制 L. amazonensis 的活力，诱导寄生虫的形态和超微结构变化，细胞体收缩，细胞质膜粗糙，细胞内内容物泄漏，ROS 产生增加，诱导细胞膜去极化和线粒体肿胀，形成细胞质脂滴和磷脂酰丝氨酸暴露，从而表明细胞凋亡样死亡的可能性。为了验证幼虫 ES 对无鞭毛体形式的功效，我们进行了吞噬测定，测量了总 ROS 和 NO。在所有浓度下，使用幼虫 ES 的治疗降低了感染百分比和每个 J774A.1 谱系巨噬细胞的无鞭毛体数量，增加了 ROS 和 TNF-α 的产生，因此表明可能存在促炎免疫调节和氧化损伤。因此，即使在低浓度下，使用幼虫 ES 处理也能有效诱导 L. amazonensis 的前鞭毛体和无鞭毛体死亡。从而表明凋亡样死亡的可能性。为了验证幼虫 ES 对无鞭毛体形式的功效，我们进行了吞噬测定，测量了总 ROS 和 NO。在所有浓度下，使用幼虫 ES 的治疗降低了感染百分比和每个 J774A.1 谱系巨噬细胞的无鞭毛体数量，增加了 ROS 和 TNF-α 的产生，因此表明可能存在促炎免疫调节和氧化损伤。因此，即使在低浓度下，使用幼虫 ES 处理也能有效诱导 L. amazonensis 的前鞭毛体和无鞭毛体死亡。从而表明凋亡样死亡的可能性。为了验证幼虫 ES 对无鞭毛体形式的功效，我们进行了吞噬测定，测量了总 ROS 和 NO。在所有浓度下，使用幼虫 ES 的治疗降低了感染百分比和每个 J774A.1 谱系巨噬细胞的无鞭毛体数量，增加了 ROS 和 TNF-α 的产生，因此表明可能存在促炎免疫调节和氧化损伤。因此，即使在低浓度下，使用幼虫 ES 处理也能有效诱导 L. amazonensis 的前鞭毛体和无鞭毛体死亡。在所有浓度下，使用幼虫 ES 的治疗降低了感染百分比和每个 J774A.1 谱系巨噬细胞的无鞭毛体数量，增加了 ROS 和 TNF-α 的产生，因此表明可能存在促炎免疫调节和氧化损伤。因此，即使在低浓度下，使用幼虫 ES 处理也能有效诱导 L. amazonensis 的前鞭毛体和无鞭毛体死亡。在所有浓度下，使用幼虫 ES 的治疗降低了感染百分比和每个 J774A.1 谱系巨噬细胞的无鞭毛体数量，增加了 ROS 和 TNF-α 的产生，因此表明可能存在促炎免疫调节和氧化损伤。因此，即使在低浓度下，使用幼虫 ES 处理也能有效诱导 L. amazonensis 的前鞭毛体和无鞭毛体死亡。