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Two polyurethanases PueA and PueB are major extracellular lipases partly secreted by the mediation of their cognate ABC exporter AprDEF in Pseudomonas protegens Pf-5
Letters in Applied Microbiology ( IF 2.0 ) Pub Date : 2021-08-03 , DOI: 10.1111/lam.13548 D-M Zha 1 , X-L Wang 1 , X-H Xiao 1 , H-Q Shi 1 , Y-W Yang 1 , X Shi 1 , Y-B Kang 2
Letters in Applied Microbiology ( IF 2.0 ) Pub Date : 2021-08-03 , DOI: 10.1111/lam.13548 D-M Zha 1 , X-L Wang 1 , X-H Xiao 1 , H-Q Shi 1 , Y-W Yang 1 , X Shi 1 , Y-B Kang 2
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Two polyurethanases PueA and PueB from Pseudomonas protegens Pf-5 have been reported to have hydrolytic activity against synthetic p-nitrophenyl palmitate of lipase substrate, and PueA may play a more effective role in this activity. However, it is still unknown whether PueA and PueB play similar parts in the lipase activity against natural acylglycerols and achieve the extracellular secretion via their cognate ABC exporter AprDEF. In this study, we investigated these questions through the construction of four markerless deletion mutants in Pf5139 (Δupp derivative of Pf-5), two heterologous co-expression strains and their three control strains in lipase-free Escherichia coli BL21(DE3), and detected their lipase activities by the tributyrin plate assay and the liquid culture assay. The results showed that PueA and PueB, classified as subfamily I.3 lipases, are major extracellular lipases involved in the uptake of oil in Pf-5, and PueA plays a leading role in extracellular lipase activity. In addition, the extracellular secretion of PueA and PueB can be partly mediated via AprDEF in Pf-5 and BL21(DE3). Finally, PueA and PueB are also able to achieve the extracellular secretion without the assistance of AprDEF in Pf-5 and BL21(DE3).
中文翻译：
两种聚氨酯酶 PueA 和 PueB 是主要的细胞外脂肪酶，部分由其同源 ABC 输出蛋白 AprDEF 在假单胞菌保护 Pf-5 中的介导分泌
据报道，来自Pseudomonas protegens Pf-5 的两种聚氨酯酶 PueA 和 PueB对合成的脂肪酶底物对硝基苯棕榈酸酯具有水解活性，PueA 可能在该活性中发挥更有效的作用。然而，PueA 和 PueB 是否在针对天然酰基甘油的脂肪酶活性中发挥相似的作用并通过它们的同源 ABC 输出体 AprDEF 实现细胞外分泌仍然是未知的。在这项研究中，我们通过在 Pf5139（Pf-5 的Δ upp衍生物）中构建四个无标记缺失突变体、两个异源共表达菌株及其在无脂肪酶大肠杆菌中的三个对照菌株来研究这些问题。BL21(DE3)，并通过三丁酸甘油酯平板试验和液体培养试验检测它们的脂肪酶活性。结果表明，PueA和PueB属于亚家族I.3脂肪酶，是参与Pf-5油吸收的主要细胞外脂肪酶，PueA在细胞外脂肪酶活性中起主导作用。此外，PueA 和 PueB 的细胞外分泌可以部分通过 Pf-5 和 BL21(DE3) 中的 AprDEF 介导。最后，在 Pf-5 和 BL21(DE3) 中，PueA 和 PueB 也能够在没有 AprDEF 帮助的情况下实现细胞外分泌。
更新日期：2021-08-03
中文翻译：
两种聚氨酯酶 PueA 和 PueB 是主要的细胞外脂肪酶，部分由其同源 ABC 输出蛋白 AprDEF 在假单胞菌保护 Pf-5 中的介导分泌
据报道，来自Pseudomonas protegens Pf-5 的两种聚氨酯酶 PueA 和 PueB对合成的脂肪酶底物对硝基苯棕榈酸酯具有水解活性，PueA 可能在该活性中发挥更有效的作用。然而，PueA 和 PueB 是否在针对天然酰基甘油的脂肪酶活性中发挥相似的作用并通过它们的同源 ABC 输出体 AprDEF 实现细胞外分泌仍然是未知的。在这项研究中，我们通过在 Pf5139（Pf-5 的Δ upp衍生物）中构建四个无标记缺失突变体、两个异源共表达菌株及其在无脂肪酶大肠杆菌中的三个对照菌株来研究这些问题。BL21(DE3)，并通过三丁酸甘油酯平板试验和液体培养试验检测它们的脂肪酶活性。结果表明，PueA和PueB属于亚家族I.3脂肪酶，是参与Pf-5油吸收的主要细胞外脂肪酶，PueA在细胞外脂肪酶活性中起主导作用。此外，PueA 和 PueB 的细胞外分泌可以部分通过 Pf-5 和 BL21(DE3) 中的 AprDEF 介导。最后，在 Pf-5 和 BL21(DE3) 中，PueA 和 PueB 也能够在没有 AprDEF 帮助的情况下实现细胞外分泌。
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