DGAT1 and DGAT2 are two acyl-CoA:diacylglycerol O-acyltransferase (DGAT) enzymes that catalyze the final step in triglyceride (TG) synthesis. TGs are the primary constituents of lipid droplets (LDs). Although it has been demonstrated that LDs modulate immune and inflammatory responses in CIK cells, little is known about whether DGAT1 and DGAT2 involve in this process. Firstly, grass carp DGAT2 was isolated and characterized, encoding 361 amino acids, and all DGAT2 proteins in genomic structures are conserved in vertebrates. Then, using TLR7 agonist, we induced LDs accumulation in CIK cells. Only DGAT1b and DGAT2 were upregulated in forming TLR7 agonist induced-LDs. Next, we utilized small-molecule inhibitors of DGAT1 and DGAT2. The results indicated that DGAT1 inactivation attenuated TG content and the relative expressions of IFNα3, NF-κB, IL-1β, and TNFα genes, whereas DGAT2 inhibition decreased TG content and the relative expressions of MyD88, IRF7, IFNα3, NF-κB, IL-1β, and TNFα genes, implying that DGAT1-generated LDs and DGAT2-generated LDs contribute to TLR7-induced immune response via different signaling pathways. Finally, inhibiting ATF6 effectively decreased DGAT-generated LDs accumulation and the expression of TLR7 signaling-related genes induced by TLR7 agonist, implying that ATF6 UPR pathway may mediate the role of DGAT-generated LDs in TLR7 signaling. Overall, we demonstrate that DGAT1 and DGAT2-catalyzed TAG synthesis may generate different LDs to provide distinct signaling platforms for innate TLR7 signaling.

DGAT1 和 DGAT2 是两种酰基辅酶A：二酰基甘油 O-酰基转移酶 (DGAT) 酶，可催化甘油三酯 (TG) 合成的最后一步。TGs是脂滴（LDs）的主要成分。尽管已经证明 LD 调节 CIK 细胞中的免疫和炎症反应，但关于 DGAT1 和 DGAT2 是否参与这一过程知之甚少。首先，草鱼DGAT2被分离鉴定，编码361个氨基酸，基因组结构中的所有DGAT2蛋白在脊椎动物中都是保守的。然后，使用 TLR7 激动剂，我们在 CIK 细胞中诱导 LDs 积累。只有 DGAT1b 和 DGAT2 在形成 TLR7 激动剂诱导的 LD 时上调。接下来，我们使用了 DGAT1 和 DGAT2 的小分子抑制剂。结果表明，DGAT1 失活减弱了 TG 含量和 IFNα3、NF-κB、IL-1β、和 TNFα 基因，而 DGAT2 抑制降低 TG 含量和 MyD88、IRF7、IFNα3、NF-κB、IL-1β 和 TNFα 基因的相对表达，这意味着 DGAT1 产生的 LD 和 DGAT2 产生的 LD 有助于 TLR7 诱导的免疫通过不同的信号通路作出反应。最后，抑制 ATF6 有效降低了 DGAT 产生的 LDs 积累和 TLR7 激动剂诱导的 TLR7 信号相关基因的表达，这意味着 ATF6 UPR 途径可能介导 DGAT 产生的 LDs 在 TLR7 信号传导中的作用。总体而言，我们证明 DGAT1 和 DGAT2 催化的 TAG 合成可以产生不同的 LD，从而为先天 TLR7 信号传导提供不同的信号传导平台。这意味着 DGAT1 产生的 LD 和 DGAT2 产生的 LD 通过不同的信号通路促进 TLR7 诱导的免疫反应。最后，抑制 ATF6 有效降低了 DGAT 产生的 LDs 积累和 TLR7 激动剂诱导的 TLR7 信号相关基因的表达，这意味着 ATF6 UPR 途径可能介导 DGAT 产生的 LDs 在 TLR7 信号传导中的作用。总体而言，我们证明 DGAT1 和 DGAT2 催化的 TAG 合成可以产生不同的 LD，从而为先天 TLR7 信号传导提供不同的信号传导平台。这意味着 DGAT1 产生的 LD 和 DGAT2 产生的 LD 通过不同的信号通路促进 TLR7 诱导的免疫反应。最后，抑制 ATF6 有效降低了 DGAT 产生的 LDs 积累和 TLR7 激动剂诱导的 TLR7 信号相关基因的表达，这意味着 ATF6 UPR 途径可能介导 DGAT 产生的 LDs 在 TLR7 信号传导中的作用。总体而言，我们证明 DGAT1 和 DGAT2 催化的 TAG 合成可以产生不同的 LD，从而为先天 TLR7 信号传导提供不同的信号传导平台。这意味着 ATF6 UPR 途径可能介导 DGAT 产生的 LD 在 TLR7 信号传导中的作用。总体而言，我们证明 DGAT1 和 DGAT2 催化的 TAG 合成可以产生不同的 LD，从而为先天 TLR7 信号传导提供不同的信号传导平台。这意味着 ATF6 UPR 途径可能介导 DGAT 产生的 LD 在 TLR7 信号传导中的作用。总体而言，我们证明 DGAT1 和 DGAT2 催化的 TAG 合成可以产生不同的 LD，从而为先天 TLR7 信号传导提供不同的信号传导平台。