Autofluorescence (AF) in formalin-fixed and paraffin-embedded tissues limit their use in immunofluorescence staining techniques. Various methods have been used to reduce AF in human and animal tissues but no protocol has been optimized for avian tissues. The present study was undertaken to evaluate different treatment methods including ammonium chloride, glycine, Trypan blue, sodium borohydride, Sudan Black B, potassium permanganate, LED light, cupric sulphate combined with glycine, ammonium chloride and cupric sulphate in reducing AF in FFPE chicken tissues for the detection of FITC labelled antibodies against immune cell markers. Chicken tissues including conjunctiva, trachea and Harderian gland presented intense non-homogenous AF in cells resembling erythrocytes, connective cells and melanocytes. Only Sudan Black B effectively reduced AF in FFPE tissues; however, no specific fluorescent signal was observed for six FITC labelled antibodies against immune cell markers. Specific fluorescent signal from the FITC-labelled antibodies was observed in frozen chicken tissue sections with minimal AF, suggesting that the AF in FFPE tissues is related to the use of formaldehyde fixatives. In conclusion, this study demonstrates for the first time that AF quenching methods commonly used for other animal species are not appropriate for use in avian tissues and that frozen tissue sections are recommended for immunofluorescence staining techniques in poultry.

福尔马林固定和石蜡包埋组织中的自发荧光 (AF) 限制了它们在免疫荧光染色技术中的使用。各种方法已被用于减少人类和动物组织中的 AF，但没有针对禽类组织优化方案。本研究旨在评估不同的处理方法，包括氯化铵、甘氨酸、台盼蓝、硼氢化钠、苏丹黑 B、高锰酸钾、LED 灯、硫酸铜联合甘氨酸、氯化铵和硫酸铜减少 FFPE 鸡组织中的 AF用于检测针对免疫细胞标志物的 FITC 标记抗体。包括结膜、气管和哈德氏腺在内的鸡组织在类似于红细胞、结缔细胞和黑素细胞的细胞中呈现出强烈的非均质 AF。只有苏丹黑 B 能有效降低 FFPE 组织中的 AF；然而，针对免疫细胞标记物的六种 FITC 标记抗体未观察到特异性荧光信号。在具有最小 AF 的冷冻鸡组织切片中观察到来自 FITC 标记抗体的特定荧光信号，表明 FFPE 组织中的 AF 与使用甲醛固定剂有关。总之，这项研究首次表明，通常用于其他动物物种的 AF 淬灭方法不适用于禽类组织，并且建议将冷冻组织切片用于家禽的免疫荧光染色技术。在具有最小 AF 的冷冻鸡组织切片中观察到来自 FITC 标记抗体的特定荧光信号，表明 FFPE 组织中的 AF 与使用甲醛固定剂有关。总之，这项研究首次表明，通常用于其他动物物种的 AF 淬灭方法不适用于禽类组织，并且建议将冷冻组织切片用于家禽的免疫荧光染色技术。在具有最小 AF 的冷冻鸡组织切片中观察到来自 FITC 标记抗体的特定荧光信号，表明 FFPE 组织中的 AF 与使用甲醛固定剂有关。总之，这项研究首次表明，通常用于其他动物物种的 AF 淬灭方法不适用于禽类组织，并且建议将冷冻组织切片用于家禽的免疫荧光染色技术。