ABSTRACT

To identify the specific region of eCG involved in FSH-like activity, the following mutant expression vectors were constructed targeting the amino acid residues 102–104 of the eCG β-subunit: single mutants, eCGβV102G/α, eCGβF103P/α, and eCGβR104K/α; double mutants, eCGβV102G;F103P/α, eCGβV102G;R104K/α, and eCGβF103P;R104K/α; triple mutant, eCGβV102G;F103P;R104K/α. The LH-like and FSH-like activities of eCG mutants were examined in CHO-K1 cells expressing rat LH/CG receptor and rat FSH receptor. The levels of eCGβV102G/α, eCGβR104K/α, and eCGβV102G;R104K/α in the culture supernatant were markedly lower than those of eCGβ/α-wt. The other mutants and rec-eCGβ/α-wt were efficiently secreted into the culture supernatant. The LH-like activities of eCGV104G/α, eCGβV102G;R104K/α, and eCGβF103P;R104K/α were approximately 61%, 52%, and 54%, respectively, of those of eCG-wt. The Rmax values of the mutants were 58.9%–78.8% those of eCG-wt with eCGβR104K/α exhibiting the lowest value. The FSH-like activities of single mutants were only 16%–20% of those of eCG-wt. Additionally, the FSH-like activity of double mutants was less than 10% of that of eCG-wt. In particular, the FSH-like activities of βV102G;R104K/α and βF103P;R104K/α were 2.5–2.9% of that of eCG-wt. These results suggest that the amino acid residues 102–104 of the eCG β-subunit are dispensable and that the residue 104 of the eCG β-subunit plays a pivotal role in signal transduction through the rat FSH receptor. Thus, these mutants may aid future studies on eCG interactions with mammalian FSH receptors in vitro and in vivo.

摘要

为了鉴定参与 FSH 样活性的 eCG 的特定区域，构建了以下突变表达载体，靶向 eCG β-亚基的氨基酸残基 102-104：单突变体、eCGβV102G/α、eCGβF103P/α 和 eCGβR104K/ α; 双突变体，eCGβV102G；F103P/α，eCGβV102G；R104K/α，和 eCGβF103P；R104K/α；三重突变体，eCGβV102G；F103P；R104K/α。在表达大鼠 LH/CG 受体和大鼠 FSH 受体的 CHO-K1 细胞中检测了 eCG 突变体的 LH 样和 FSH 样活性。培养上清液中eCGβV102G/α、eCGβR104K/α和eCGβV102G;R104K/α的水平明显低于eCGβ/α-wt。其他突变体和 rec-eCGβ/α-wt 被有效分泌到培养上清液中。eCGV104G/α、eCGβV102G;R104K/α和eCGβF103P;R104K/α的LH样活性分别约为61%、52%和54%，那些心电图重量。突变体的 Rmax 值为 eCG-wt 的 58.9%–78.8%，其中 eCGβR104K/α 表现出最低值。单个突变体的 FSH 样活性仅为 eCG-wt 的 16%–20%。此外，双突变体的 FSH 样活性小于 eCG-wt 的 10%。特别是βV102G;R104K/α和βF103P;R104K/α的FSH样活性是eCG-wt的2.5-2.9%。这些结果表明 eCG β-亚基的氨基酸残基 102-104 是可有可无的，并且 eCG β-亚基的残基 104 在通过大鼠 FSH 受体的信号转导中起关键作用。因此，这些突变体可能有助于未来研究 eCG 与哺乳动物 FSH 受体的相互作用 单个突变体的 FSH 样活性仅为 eCG-wt 的 16%–20%。此外，双突变体的 FSH 样活性小于 eCG-wt 的 10%。特别是βV102G;R104K/α和βF103P;R104K/α的FSH样活性是eCG-wt的2.5-2.9%。这些结果表明 eCG β-亚基的氨基酸残基 102-104 是可有可无的，并且 eCG β-亚基的残基 104 在通过大鼠 FSH 受体的信号转导中起关键作用。因此，这些突变体可能有助于未来研究 eCG 与哺乳动物 FSH 受体的相互作用 单个突变体的 FSH 样活性仅为 eCG-wt 的 16%–20%。此外，双突变体的 FSH 样活性小于 eCG-wt 的 10%。特别是βV102G;R104K/α和βF103P;R104K/α的FSH样活性是eCG-wt的2.5-2.9%。这些结果表明 eCG β-亚基的氨基酸残基 102-104 是可有可无的，并且 eCG β-亚基的残基 104 在通过大鼠 FSH 受体的信号转导中起关键作用。因此，这些突变体可能有助于未来研究 eCG 与哺乳动物 FSH 受体的相互作用 这些结果表明 eCG β-亚基的氨基酸残基 102-104 是可有可无的，并且 eCG β-亚基的残基 104 在通过大鼠 FSH 受体的信号转导中起关键作用。因此，这些突变体可能有助于未来研究 eCG 与哺乳动物 FSH 受体的相互作用 这些结果表明 eCG β-亚基的氨基酸残基 102-104 是可有可无的，并且 eCG β-亚基的残基 104 在通过大鼠 FSH 受体的信号转导中起关键作用。因此，这些突变体可能有助于未来研究 eCG 与哺乳动物 FSH 受体的相互作用体外和体内。