Avian H9N2 influenza viruses in East Asia are genetically diversified and multiple genotypes (A-W) have been established in poultry. Genotype S strains are currently the most prevalent strains, have caused many human infections and pose a public health threat. In this study, human adaptation mutations in the PB2 polymerase in genotype S strains were identified by database screening. Several PB2 double mutations were identified that acted cooperatively to produce higher genotype S virus polymerase activity and replication in human cells than in avian cells and to increase viral growth and virulence in mice. These mutations were chronologically and phylogenetically clustered in a new group within genotype S viruses. Most of the relevant human virus isolates carry the PB2-A588V mutation together with another PB2 mutation (i.e. K526R, E627V or E627K), indicating a host adaptation advantage for these double mutations. The prevalence of PB2 double mutations in human H9N2 virus isolates has also been found in genetically related human H7N9 and H10N8 viruses. These results suggested that PB2 double mutations in viruses in the field acted cooperatively to increase human adaptation of the currently prevalent H9N2 genotype S strains. This may have contributed to the recent surge of H9N2 infections and may be applicable to the human adaptation of several other avian influenza viruses. Our study provides a better understanding of the human adaptation pathways of genetically related H9N2, H7N9 and H10N8 viruses in nature.

中文翻译：

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H9N2禽流感病毒PB2基因的双突变协同作用增加病毒宿主对人类感染的适应和复制

东亚的禽 H9N2 流感病毒具有遗传多样性，在家禽中已经建立了多种基因型 (AW)。基因型 S 菌株是目前最流行的菌株，已引起许多人类感染并构成公共健康威胁。在这项研究中，通过数据库筛选鉴定了基因型 S 菌株中 PB2 聚合酶的人类适应突变。确定了几个 PB2 双突变，它们协同作用在人类细胞中产生比在禽细胞中更高的基因型 S 病毒聚合酶活性和复制，并增加了小鼠的病毒生长和毒力。这些突变按时间顺序和系统发育聚集在基因型 S 病毒中的一个新组中。大多数相关的人类病毒分离株携带 PB2-A588V 突变和另一个 PB2 突变（即 K526R、E627V 或 E627K），表明这些双突变具有宿主适应优势。在人类 H9N2 病毒分离株中 PB2 双突变的流行也在遗传相关的人类 H7N9 和 H10N8 病毒中发现。这些结果表明，该领域病毒中的 PB2 双突变协同作用，以增加人类对当前流行的 H9N2 基因型 S 毒株的适应性。这可能导致了最近 H9N2 感染的激增，并且可能适用于其他几种禽流感病毒的人类适应性。我们的研究提供了对自然界中与遗传相关的 H9N2、H7N9 和 H10N8 病毒的人类适应途径的更好理解。在人类 H9N2 病毒分离株中 PB2 双突变的流行也在遗传相关的人类 H7N9 和 H10N8 病毒中发现。这些结果表明，该领域病毒中的 PB2 双突变协同作用，以增加人类对当前流行的 H9N2 基因型 S 毒株的适应性。这可能导致了最近 H9N2 感染的激增，并且可能适用于其他几种禽流感病毒的人类适应性。我们的研究提供了对自然界中与遗传相关的 H9N2、H7N9 和 H10N8 病毒的人类适应途径的更好理解。在人类 H9N2 病毒分离株中 PB2 双突变的流行也在遗传相关的人类 H7N9 和 H10N8 病毒中发现。这些结果表明，该领域病毒中的 PB2 双突变协同作用，以增加人类对当前流行的 H9N2 基因型 S 毒株的适应性。这可能导致了最近 H9N2 感染的激增，并且可能适用于其他几种禽流感病毒的人类适应性。我们的研究提供了对自然界中与遗传相关的 H9N2、H7N9 和 H10N8 病毒的人类适应途径的更好理解。这可能导致了最近 H9N2 感染的激增，并且可能适用于其他几种禽流感病毒的人类适应性。我们的研究提供了对自然界中与遗传相关的 H9N2、H7N9 和 H10N8 病毒的人类适应途径的更好理解。这可能导致了最近 H9N2 感染的激增，并且可能适用于其他几种禽流感病毒的人类适应性。我们的研究提供了对自然界中与遗传相关的 H9N2、H7N9 和 H10N8 病毒的人类适应途径的更好理解。