Matrix metalloproteinases (MMPs) modify bioactive factors via selective processing or degradation resulting in tumour-promoting or tumour-suppressive effects, such as those by MMP8 in various cancers. We mapped the substrates of MMP8 to elucidate its previously shown tumour-protective role in oral tongue squamous cell carcinoma (OTSCC). MMP8 overexpressing (+) HSC-3 cells, previously demonstrated to have reduced migration and invasion, showed enhanced cell-cell adhesion. By analysing the secretomes of MMP8 + and control cells with terminal amine isotopic labelling of substrates (TAILS) coupled with liquid chromatography and tandem mass spectrometry (LC-MS/MS), we identified 36 potential substrates of MMP8, including FXYD domain-containing ion transport regulator 5 (FXYD5). An anti-adhesive glycoprotein FXYD5 has been previously shown to predict poor survival in OTSCC. Cleavage of FXYD5 by MMP8 was confirmed using recombinant proteins. Furthermore, we detected a loss of FXYD5 levels on cell membrane of MMP8 + cells, which was rescued by inhibition of the proteolytic activity of MMP8. Silencing (si) FXYD5 increased the cell-cell adhesion of control but not that of MMP8 + cells. siFXYD5 diminished the viability and motility of HSC-3 cells independent of MMP8 and similar effects were seen in another tongue cancer cell line, SCC-25. FXYD5 is a novel substrate of MMP8 and reducing FXYD5 levels either with siRNA or cleavage by MMP8 increases cell adhesion leading to reduced motility. FXYD5 being a known prognostic factor in OTSCC, our findings strengthen its potential as a therapeutic target.

基质金属蛋白酶 (MMP) 通过选择性加工或降解来修饰生物活性因子，从而产生促进肿瘤或抑制肿瘤的作用，例如 MMP8 在各种癌症中的作用。我们绘制了 MMP8 的底物以阐明其先前显示的在口腔舌鳞状细胞癌 (OTSCC) 中的肿瘤保护作用。MMP8 过表达 (+) HSC-3 细胞，以前被证明具有减少的迁移和侵袭，显示增强的细胞 - 细胞粘附。通过使用底物的末端胺同位素标记 (TAILS) 结合液相色谱和串联质谱 (LC-MS/MS) 分析 MMP8 + 和对照细胞的分泌组，我们确定了 MMP8 的 36 种潜在底物，包括含有 FXYD 结构域的离子运输调节剂 5 (FXYD5)。先前已证明抗粘连糖蛋白 FXYD5 可预测 OTSCC 的不良存活率。使用重组蛋白证实 MMP8 对 FXYD5 的切割。此外，我们在 MMP8 + 细胞的细胞膜上检测到 FXYD5 水平的丧失，这是通过抑制 MMP8 的蛋白水解活性来挽救的。沉默 (si) FXYD5 增加了对照的细胞间粘附，但不增加 MMP8 + 细胞的粘附。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。使用重组蛋白证实 MMP8 对 FXYD5 的切割。此外，我们在 MMP8 + 细胞的细胞膜上检测到 FXYD5 水平的丧失，这是通过抑制 MMP8 的蛋白水解活性来挽救的。沉默 (si) FXYD5 增加了对照的细胞间粘附，但不增加 MMP8 + 细胞的粘附。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。使用重组蛋白证实 MMP8 对 FXYD5 的切割。此外，我们在 MMP8 + 细胞的细胞膜上检测到 FXYD5 水平的丧失，这是通过抑制 MMP8 的蛋白水解活性来挽救的。沉默 (si) FXYD5 增加了对照的细胞间粘附，但不增加 MMP8 + 细胞的粘附。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。我们检测到 MMP8 + 细胞膜上 FXYD5 水平的丧失，这是通过抑制 MMP8 的蛋白水解活性来挽救的。沉默 (si) FXYD5 增加了对照的细胞间粘附，但不增加 MMP8 + 细胞的粘附。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。我们检测到 MMP8 + 细胞膜上 FXYD5 水平的丧失，这是通过抑制 MMP8 的蛋白水解活性来挽救的。沉默 (si) FXYD5 增加了对照的细胞间粘附，但不增加 MMP8 + 细胞的粘附。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。siFXYD5 降低了独立于 MMP8 的 HSC-3 细胞的活力和运动性，并且在另一种舌癌细胞系 SCC-25 中观察到了类似的效果。FXYD5 是 MMP8 的新型底物，通过 siRNA 或 MMP8 切割降低 FXYD5 水平会增加细胞粘附，导致运动性降低。FXYD5 是 OTSCC 中已知的预后因素，我们的研究结果加强了其作为治疗靶点的潜力。