Multiple myeloma (MM) is a plasma cell malignancy of bone marrow. In the present study, we aimed to study the function and potential mechanism of the antisense non-coding RNA in the INK4 Locus (ANRIL) in MM. The expression levels of ANRIL in MM patients and healthy donors were evaluated by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). The effects and mechanisms of ANRIL in MM were evaluated by cell viability assay, BrdU incorporation assay, tumor xenograft model, flow cytometry, western blot, RNA immunoprecipitation (RIP), transcriptome RNA sequencing, and chromatin immunoprecipitation (ChIP). We found that ANRIL was upregulated in MM patients and cell lines, and associated with advanced international staging system (ISS) stage and poor overall survival. Enforced ANRIL expression promoted proliferation and tumor xenograft growth of MM cells, while knockdown of ANRIL exhibited opposite effects. Moreover, ANRIL overexpression increased the half-maximal inhibitory concentration (IC50) of bortezomib and reduced bortezomib-induced apoptosis in MM cells. ANRIL was found to accumulate in the nucleus of MM cells, and interact with EZH2 by RIP assay. Transcriptome RNA sequencing identified PTEN as a target of ANRIL in MM cells. In ChIP assay, knockdown of ANRIL reduced EZH2 occupancy and H3K27me3 binding to the promoter region of PTEN. Furthermore, EZH2 knockout or PTEN restoration abrogated the effects caused by ANRIL overexpression in MM cells. Our results indicated that ANRIL exerted oncogenic functions and conferred chemoresistance of MM cells by EZH2-mediated epigenetically silencing of PTEN.

中文翻译：

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LncRNA ANRIL 通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默促进多发性骨髓瘤进展和硼替佐米耐药。

多发性骨髓瘤（MM）是一种骨髓浆细胞恶性肿瘤。在本研究中，我们旨在研究MM中INK4基因座（ANRIL）中反义非编码RNA的功能和潜在机制。通过定量实时聚合酶链反应（qRT-PCR）评估MM患者和健康供体中ANRIL的表达水平。通过细胞活力测定、BrdU 掺入测定、肿瘤异种移植模型、流式细胞术、蛋白质印迹、RNA 免疫沉淀 (RIP)、转录组 RNA 测序和染色质免疫沉淀 (ChIP) 评估 ANRIL 在 MM 中的作用和机制。我们发现 ANRIL 在 MM 患者和细胞系中上调，并与先进的国际分期系统 (ISS) 分期和较差的总生存期相关。强制 ANRIL 表达促进 MM 细胞的增殖和肿瘤异种移植物生长，而 ANRIL 的敲低则表现出相反的效果。此外，ANRIL 过表达增加了硼替佐米的半数最大抑制浓度 (IC50) 并减少了硼替佐米诱导的 MM 细胞凋亡。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。而 ANRIL 的敲低则表现出相反的效果。此外，ANRIL 过表达增加了硼替佐米的半数最大抑制浓度 (IC50) 并减少了硼替佐米诱导的 MM 细胞凋亡。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。而 ANRIL 的敲低则表现出相反的效果。此外，ANRIL 过表达增加了硼替佐米的半数最大抑制浓度 (IC50) 并减少了硼替佐米诱导的 MM 细胞凋亡。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。ANRIL 过表达增加了硼替佐米的半数最大抑制浓度 (IC50) 并减少了硼替佐米诱导的 MM 细胞凋亡。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。ANRIL 过表达增加了硼替佐米的半数最大抑制浓度 (IC50) 并减少了硼替佐米诱导的 MM 细胞凋亡。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。RIP 检测发现 ANRIL 在 MM 细胞核中积累，并与 EZH2 相互作用。转录组 RNA 测序将 PTEN 鉴定为 MM 细胞中 ANRIL 的靶标。在 ChIP 分析中，敲除 ANRIL 降低了 EZH2 的占有率和 H3K27me3 与 PTEN 启动子区域的结合。此外，EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。EZH2 敲除或 PTEN 恢复消除了 MM 细胞中 ANRIL 过表达引起的影响。我们的结果表明，ANRIL 发挥致癌功能，并通过 EZH2 介导的 PTEN 表观遗传沉默赋予 MM 细胞的化学抗性。