Background Reactive oxygen species (ROS) are produced in the body during normal metabolism by means of enzymes and non-enzymatic chemical reduction of molecular oxygen. In case of the prevalence of ROS formation over their elimination, highly reactive free radicals can be accumulated and can cause multiple damages to the biomolecules and cells. Determination of isoprostanes in biological matrices is most often used to register free radical damage and requires selective, sensitive and specific techniques. Methods This study presents the development and validation of the LC-MS/MS method for the determination of 8-iso-Prostaglandin F2α in human plasma utilising a modified liquid-liquid extraction procedure with phase separation. Results Modified sample preparation procedure assured higher extraction yield, clear separation of organic layer from the plasma water phase and protein precipitates, and better-purified product for instrumental analysis. Linearity was validated in the range 0.1-5.0 µg/L with R2 > 0.996; normalised matrix varied between 86.0% and 108.3%, accuracy ranged from 90.4 % to 113.9% and precision both within runs and between runs was less than 7%. With a run time of 10 min, a throughput of over 50 samples per working day could be performed. Conclusions The method meets all the current industrial validation criteria and allows the accurate and precise determination of 8-iso-PGF2α in human plasma at diagnostically significant concentration range. Uvod Reaktivne vrste kiseonika (ROS) nastaju u telu tokom normalnog metabolizma pomoću enzima i neenzimske hemijske redukcije molekularnog kiseonika. U slučaju bržeg formiranja ROS od njihovog eliminisanja, mogu se akumulirati visoko reaktivni slobodni radikali i mogu izazvati višestruka oštećenja biomolekula i ćelija. Određivanje izoprostana u biološkim matricama najčešće se koristi za registrovanje oštećenja prouzrokovana slobodnim radikalima i zahteva selektivne, osetljive i posebne metode rada. Metode Ovo istraživanje prikazuje razvoj i validaciju LC-MS/MS metode za određivanje 8-izo-prostaglandina F2α u ljudskoj plazmi pomoću modifikovanog postupka ekstrakcije tečno-tečno sa razdvajanjem faza. Rezultati Modifikovana procedura pripreme uzoraka osigurala je veći učinak ekstrakcije, jasno odvajanje organskog sloja od vodene faze u plazmi i taloga proteina, i bolje pročišćen proizvod za instrumentalnu analizu. Linearnost je potvrđena u opsegu 0,1-5,0 µg/L sa R2 > 0,996; normalizovana matrica varirala je između 86,0 i 108,3%, tačnost je bila u rasponu od 90,4% i 113,9%, a preciznost i u toku i između faza bila je manja od 7%. U toku radnog dana može se izvršiti propusnost od preko 50 uzoraka sa trajanjem od 10 minuta. Zaključak Ova metoda ispunjava sve trenutne kriterijume industrijske validacije i omogućava tačno i precizno određivanje 8-izo-PGF2α u ljudskoj plazmi u dijagnostički značajnom rasponu koncentracije.

中文翻译：

---

相分离液液萃取，用于通过LC-MS / MS定量测定人血浆中的8-异前列腺素F2α。

背景技术在正常的新陈代谢过程中，通过酶和分子氧的非酶化学还原，在体内产生活性氧（ROS）。如果在消除过程中普遍存在ROS形成，则高反应性自由基会积累起来，并可能对生物分子和细胞造成多重损害。生物基质中异前列腺素的测定最常用于记录自由基损伤，需要选择性，灵敏和特异的技术。方法本研究提出了一种改进的液-液萃取相分离法测定人血浆中8-异前列腺素F2α的LC-MS / MS方法的开发和验证。结果改进的样品制备程序可确保更高的提取率，可以从血浆水相中清楚地分离出有机层和蛋白质沉淀物，并且可以将纯化得更好的产品用于仪器分析。线性度在0.1-5.0 µg / L范围内得到验证，R2> 0.996；归一化的矩阵在86.0％和108.3％之间变化，准确度在90.4％到113.9％之间，并且运行内和运行间的精度均低于7％。运行时间为10分钟，每个工作日可以完成50个以上样品的通量。结论该方法符合当前所有工业验证标准，并可以在诊断上显着的浓度范围内准确，准确地测定人血浆中的8-iso-PGF2α。不动产销售（ROS）不正常销售代谢正常化代谢。Uslučajubržegformiranja ROS od njihovog eliminisanja，mogu se akumulirati visoko reaktivni slobodni radikali i mogu izazvativišestrukaoštećenjabiomolekula ićelija。男性和女性之间的竞争关系，国家和地区之间的关系。液相色谱-质谱/质谱联用仪（LC-MS / MS）8-偶氮-前列腺素F2α和磷酸酯酶质谱联用剂（z-z-z-vans-prostaglandinaF2αu ljudskoj plazmipomoćumodifikovanog postupka ekstrakcijetečno-tečnosa razdvajanje fa。）Rezultati Modifikovana procedura pripreme uzoraka osigurala jevećiučinakekstrakcije，jasno odvajanje organskog sloja od vodene faze u plazmi i taloga proteina，iboljepročišćenproizvod za instrumentalnu anal。线性度为0,1-5,0 µg / L，R2> 0,996；Normalizovana matrica varirala jeizmeđu86,0 i 108,3％，tačnostje bila u rasponu od 90,4％i 113,9％，preciznost iu toku iizmeđufaza bila je manja od 7％。您必须先从50 uzoraka sa trajanjem od 10 minuta中获得收益。ZaključakOva metoda ispunjava sve trenutne kriterijume industrijske validacije iomogućavatačnoi preciznoodređivanje8-izo-PGF2αu ljudskoj plazmi udijagnostičkiznačajnomrasponu koncentracije。