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Novel Long-Term Phytase from Serratia odorifera: Cloning, Expression, and Characterization
ACS Food Science & Technology ( IF 2.6 ) Pub Date : 2021-04-22 , DOI: 10.1021/acsfoodscitech.0c00074 Ignasi Salaet 1 , Ramon Marques 1 , Tula Yance-Chávez 1 , Judit Macías-Vidal 2 , David Gimémez-Zaragoza 3 , Rosa Aligue 3
ACS Food Science & Technology ( IF 2.6 ) Pub Date : 2021-04-22 , DOI: 10.1021/acsfoodscitech.0c00074 Ignasi Salaet 1 , Ramon Marques 1 , Tula Yance-Chávez 1 , Judit Macías-Vidal 2 , David Gimémez-Zaragoza 3 , Rosa Aligue 3
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The appA-So gene, encoding a phytase from Serratia odorifera, was cloned and heterologously expressed in Komagataella phaffii. The open reading frame of appA-So comprised 1281 bp that encoded a 426-amino acid protein, including a 27-amino acid signal peptide. The encoded phytase, AppA-So, showed 52% homology with other histidine acid phosphatases. The purified recombinant phytase showed optimal activity at 55 °C and pH 4.5, exhibiting enzymatic activity between pH 3.7 and 5.8, with a specific activity of 1123 U/mg at pH 4.5 and 37 °C. The AppA-So protein retained more than 85% of its initial activity after incubation in different pH conditions (pH 2.5–6.5) at 37 °C for 3 h. AppA-So activity was maintained over time and displayed a low Michaelis–Menten constant (Km) of 0.093 g/L. To the best of our knowledge, this is the first report of the cloning and characterization of the phytase from S. odorifera. Comparison of AppA-So with other well-known phytases suggests that the S. odorifera phytase has the lowest Km and highest stable activity over time, making it very suitable for use in the animal feed industry.
中文翻译：
新型Serratia odorifera的长期植酸酶：克隆，表达和表征
克隆了编码臭味沙雷氏菌植酸酶的appA-So基因，并在Komagataella phaffii中异源表达。appA-So的开放阅读框架包含1281bp的编码426个氨基酸的蛋白质，包括27个氨基酸的信号肽。编码的植酸酶AppA-So与其他组氨酸磷酸酶显示52％的同源性。纯化的重组肌醇六磷酸酶在55°C和pH 4.5时显示最佳活性，在pH 3.7和5.8之间显示酶活性，在pH 4.5和37°C时的比活性为1123 U / mg。在37°C的不同pH条件（pH 2.5–6.5）下孵育3小时后，AppA-So蛋白保留了其初始活性的85％以上。AppA-So活性会随着时间的流逝而保持不变，并显示出0.093 g / L的低Michaelis-Menten常数（Km）。据我们所知，这是克隆并鉴定了S. odorifera中植酸酶的第一份报告。。APPA，因此，与其他知名的植酸酶的比较表明，S.香黄檀植酸酶具有最低的Km和最高稳定一段时间的活动，使得它非常适合在动物饲料行业使用。
更新日期：2021-05-22
中文翻译：
新型Serratia odorifera的长期植酸酶：克隆，表达和表征
克隆了编码臭味沙雷氏菌植酸酶的appA-So基因，并在Komagataella phaffii中异源表达。appA-So的开放阅读框架包含1281bp的编码426个氨基酸的蛋白质，包括27个氨基酸的信号肽。编码的植酸酶AppA-So与其他组氨酸磷酸酶显示52％的同源性。纯化的重组肌醇六磷酸酶在55°C和pH 4.5时显示最佳活性，在pH 3.7和5.8之间显示酶活性，在pH 4.5和37°C时的比活性为1123 U / mg。在37°C的不同pH条件（pH 2.5–6.5）下孵育3小时后，AppA-So蛋白保留了其初始活性的85％以上。AppA-So活性会随着时间的流逝而保持不变，并显示出0.093 g / L的低Michaelis-Menten常数（Km）。据我们所知，这是克隆并鉴定了S. odorifera中植酸酶的第一份报告。。APPA，因此，与其他知名的植酸酶的比较表明，S.香黄檀植酸酶具有最低的Km和最高稳定一段时间的活动，使得它非常适合在动物饲料行业使用。
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