V(D)J recombination by the RAG1 and RAG2 protein complex in developing lymphocytes includes DNA double strand break (DSB) intermediates. RAG2 undergoes export from the nucleus and enrichment at the centrosome minutes following production of DSBs by genotoxic stress, suggesting that RAG2 participates in cellular responses to DSBs such as those generated during V(D)J recombination. To determine the effect of RAG2 expression on cell viability following DSB generation, we measured pre-B cells that expressed either full length (FL) wild-type RAG2, or a T490A mutant of RAG2 that has increased stability and fails to undergo nuclear export following generation of DSBs. Each RAG2 construct was labeled with GFP at the N-terminus. Compared to the T490A mutant, cells expressing FL RAG2 exhibited elevated apoptosis by 24 h following irradiation, and this coincided with a greater amount of Caspase 3 cleavage measured in cell lysates. Pre-B cells expressing either RAG2 protein exhibited similar increases in phospho-p53 levels following irradiation. Interestingly, FL RAG2-expressing cells exhibited elevated division relative to the T490A clone beginning ~24 h following irradiation, as well as an increased percentage of cells proceeding through mitosis, suggesting an improved rate of recovery following the initial burst in apoptosis. Altogether, these data show that FL RAG2, but not its stable nuclear export-defective T490A mutant, participates in pre-B cell decisions between apoptosis versus DNA repair and cell cycle progression following DNA damage.

RAG1 和 RAG2 蛋白复合物在发育中的淋巴细胞中的 V(D)J 重组包括 DNA 双链断裂 (DSB) 中间体。在通过基因毒性应激产生 DSB 后，RAG2 从细胞核输出并在中心体富集几分钟，这表明 RAG2 参与了对 DSB 的细胞反应，例如在 V(D)J 重组过程中产生的反应。为了确定 DSB 生成后 RAG2 表达对细胞活力的影响，我们测量了表达全长 (FL) 野生型 RAG2 或 RAG2 的 T490A 突变体的前 B 细胞，该突变体具有增加的稳定性并且在以下情况下无法进行核输出DSB的产生。每个 RAG2 构建体在 N 末端用 GFP 标记。与 T490A 突变体相比，表达 FL RAG2 的细胞在照射后 24 小时表现出升高的细胞凋亡，这与在细胞裂解物中测量到的更大量的 Caspase 3 切割相吻合。表达任一 RAG2 蛋白的前 B 细胞在辐照后表现出类似的磷酸化 p53 水平增加。有趣的是，表达 FL RAG2 的细胞相对于 T490A 克隆在照射后约 24 小时开始表现出更高的分裂，以及通过有丝分裂进行的细胞百分比增加，这表明在细胞凋亡的初始爆发后恢复率有所提高。总之，这些数据表明，FL RAG2，但不是其稳定的核输出缺陷型 T490A 突变体，参与了细胞凋亡与 DNA 修复和 DNA 损伤后细胞周期进程之间的前 B 细胞决定。表达任一 RAG2 蛋白的前 B 细胞在辐照后表现出类似的磷酸化 p53 水平增加。有趣的是，表达 FL RAG2 的细胞相对于 T490A 克隆在照射后约 24 小时开始表现出更高的分裂，以及通过有丝分裂进行的细胞百分比增加，这表明在细胞凋亡的初始爆发后恢复率有所提高。总之，这些数据表明，FL RAG2，但不是其稳定的核输出缺陷型 T490A 突变体，参与了细胞凋亡与 DNA 修复和 DNA 损伤后细胞周期进程之间的前 B 细胞决定。表达任一 RAG2 蛋白的前 B 细胞在辐照后表现出类似的磷酸化 p53 水平增加。有趣的是，表达 FL RAG2 的细胞相对于 T490A 克隆在照射后约 24 小时开始表现出更高的分裂，以及通过有丝分裂进行的细胞百分比增加，这表明在细胞凋亡的初始爆发后恢复率有所提高。总之，这些数据表明，FL RAG2，但不是其稳定的核输出缺陷型 T490A 突变体，参与了细胞凋亡与 DNA 修复和 DNA 损伤后细胞周期进程之间的前 B 细胞决定。以及通过有丝分裂进行的细胞百分比增加，表明在细胞凋亡的初始爆发后恢复率有所提高。总之，这些数据表明，FL RAG2，但不是其稳定的核输出缺陷型 T490A 突变体，参与了细胞凋亡与 DNA 修复和 DNA 损伤后细胞周期进程之间的前 B 细胞决定。以及通过有丝分裂进行的细胞百分比增加，表明在细胞凋亡的初始爆发后恢复率有所提高。总之，这些数据表明，FL RAG2，但不是其稳定的核输出缺陷型 T490A 突变体，参与了细胞凋亡与 DNA 修复和 DNA 损伤后细胞周期进程之间的前 B 细胞决定。