ABSTRACT

This study is performed to evaluate the role of long noncoding RNA (lncRNA) LINC00619 in osteosarcoma through the PI3K-Akt signalling pathway by binding to HGF. Osteosarcoma and osteochondroma tissues from patients were collected. The relationship between lncRNA LINC00619 and HGF was proved by the dual-luciferase reporter gene assay. The expression patterns of lncRNA LINC00619 as well as the levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), hepatocyte growth factor (HGF), phosphoinositide 3-kinase (PI3K), protein kinase B (Akt), Bax, Bcl-2, alkaline phosphatase (ALP), and osteopontin (OPN) were detected by RT-qPCR and Western blot analysis. In addition, MTT assay, flow cytometry, scratch test, and Transwell assay were performed to assess the cell proliferation, cell cycle distribution, apoptosis, cell migration, and invasion in each group, respectively. Osteosarcoma tissues presented with elevated positive expression rate of HGF, up-regulated expression levels of PCNA, HGF, PI3K, Akt, Bcl-2, ALP and OPN, and down-regulated expressions of Bax and LINC00619. HGF was verified as a target gene of lncRNA LINC00619. LINC00619 was found to down-regulate the expressions of PCNA, HGF, PI3K, Akt, Bcl-2, ALP, and OPN in osteosarcoma cells. Up-regulation of lncRNA LINC00619 decreased cell growth, migration intensity, and invasion ability, but enhanced the apoptosis rate of osteosarcoma cells. Our findings suggest that lncRNA LINC00619 inhibits proliferation, migration and invasion and improves apoptosis of osteosarcoma cells through the inhibition of the activation of the HGF-dependent PI3K-Akt signalling pathway.

摘要

本研究旨在通过 PI3K-Akt 信号通路与 HGF 结合，评估长链非编码 RNA (lncRNA) LINC00619 在骨肉瘤中的作用。收集患者的骨肉瘤和骨软骨瘤组织。lncRNA LINC00619与HGF的关系通过双荧光素酶报告基因检测得到证实。lncRNA LINC00619的表达模式以及增殖细胞核抗原（PCNA）、肝细胞生长因子（HGF）、磷酸肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（Akt）、Bax、Bcl-2、碱性磷酸酶的水平(ALP) 和骨桥蛋白 (OPN) 通过 RT-qPCR 和蛋白质印迹分析检测。此外，采用MTT法、流式细胞仪、划痕法和Transwell法检测各组细胞增殖、细胞周期分布、凋亡、细胞迁移和侵袭情况。分别。骨肉瘤组织HGF阳性表达率升高，PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP和OPN表达上调，Bax和LINC00619表达下调。HGF被证实为lncRNA LINC00619的靶基因。LINC00619 被发现可下调骨肉瘤细胞中 PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP 和 OPN 的表达。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。骨肉瘤组织HGF阳性表达率升高，PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP和OPN表达上调，Bax和LINC00619表达下调。HGF被证实为lncRNA LINC00619的靶基因。LINC00619 被发现可下调骨肉瘤细胞中 PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP 和 OPN 的表达。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。骨肉瘤组织HGF阳性表达率升高，PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP和OPN表达上调，Bax和LINC00619表达下调。HGF被证实为lncRNA LINC00619的靶基因。LINC00619 被发现可下调骨肉瘤细胞中 PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP 和 OPN 的表达。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。Bax 和 LINC00619 的表达下调。HGF被证实为lncRNA LINC00619的靶基因。LINC00619 被发现可下调骨肉瘤细胞中 PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP 和 OPN 的表达。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。Bax 和 LINC00619 的表达下调。HGF被证实为lncRNA LINC00619的靶基因。LINC00619 被发现可下调骨肉瘤细胞中 PCNA、HGF、PI3K、Akt、Bcl-2、ALP 和 OPN 的表达。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。lncRNA LINC00619的上调降低了细胞生长、迁移强度和侵袭能力，但提高了骨肉瘤细胞的凋亡率。我们的研究结果表明，lncRNA LINC00619 通过抑制 HGF 依赖性 PI3K-Akt 信号通路的激活来抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭，并改善骨肉瘤细胞的凋亡。