Endothelial dysfunction, characterised by impaired nitric oxide (NO) bioavailability, arises in response to a variety of cardiovascular risk factors and precedes atherosclerosis. NO is produced by tight regulation of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) activity in response to vasodilatory stimuli. This regulation of eNOS is mediated in part by store-operated calcium entry (SOCE). We hypothesized that both ATP- and flow-induced eNOS activation are regulated by SOCE derived from Orai1 channels and members of the transient receptor potential canonical (TRPC) channel family. Bovine aortic endothelial cells (BAECs) were pre-treated with pharmacological inhibitors of TRPC channels and Orai1 to examine their effect on calcium signaling and eNOS activation in response to flow and ATP. The peak and sustained ATP-induced calcium signal and the resulting eNOS activation were attenuated by inhibition of TRPC3, which we found to be store operated. TRPC4 blockade reduced the transient peak in calcium concentration following ATP stimulation, but did not significantly reduce eNOS activity. Simultaneous TRPC3 & 4 inhibition reduced flow-induced NO production via alterations in phosphorylation-mediated eNOS activity. Inhibition of TRPC1/6 or Orai1 failed to lower ATP-induced calcium entry or eNOS activation. Our results suggest that TRPC3 is a store-operated channel in BAECs and is the key regulator of ATP-induced eNOS activation, whereas flow stimulation also recruits TRPC4 into the pathway for the synthesis of NO.

以一氧化氮 (NO) 生物利用度受损为特征的内皮功能障碍是对多种心血管危险因素的反应，并且在动脉粥样硬化之前出现。NO 是通过严格调节内皮一氧化氮合酶 (eNOS) 活性来响应血管扩张刺激而产生的。eNOS 的这种调节部分是由储存操作的钙进入 (SOCE) 介导的。我们假设 ATP 和流量诱导的 eNOS 激活均受源自 Orai1 通道和瞬时受体电位经典 (TRPC) 通道家族成员的 SOCE 调节。用 TRPC 通道和 Orai1 的药理学抑制剂对牛主动脉内皮细胞 (BAEC) 进行预处理，以检查它们对钙信号传导和 eNOS 响应流动和 ATP 激活的影响。峰值和持续的 ATP 诱导的钙信号和由此产生的 eNOS 激活通过抑制 TRPC3 减弱，我们发现 TRPC3 是储存操作的。TRPC4 阻断降低了 ATP 刺激后钙浓度的瞬时峰值，但没有显着降低 eNOS 活性。同时抑制 TRPC3 和 4 通过改变磷酸化介导的 eNOS 活性来减少流量诱导的 NO 产生。TRPC1/6 或 Orai1 的抑制未能降低 ATP 诱导的钙进入或 eNOS 激活。我们的研究结果表明，TRPC3 是 BAECs 中的一个储存操作通道，是 ATP 诱导的 eNOS 激活的关键调节因子，而流动刺激也将 TRPC4 募集到合成 NO 的途径中。TRPC4 阻断降低了 ATP 刺激后钙浓度的瞬时峰值，但没有显着降低 eNOS 活性。同时抑制 TRPC3 和 4 通过改变磷酸化介导的 eNOS 活性来减少流量诱导的 NO 产生。TRPC1/6 或 Orai1 的抑制未能降低 ATP 诱导的钙进入或 eNOS 激活。我们的研究结果表明，TRPC3 是 BAECs 中的一个储存操作通道，是 ATP 诱导的 eNOS 激活的关键调节因子，而流动刺激也将 TRPC4 募集到合成 NO 的途径中。TRPC4 阻断降低了 ATP 刺激后钙浓度的瞬时峰值，但没有显着降低 eNOS 活性。同时抑制 TRPC3 和 4 通过改变磷酸化介导的 eNOS 活性来减少流量诱导的 NO 产生。TRPC1/6 或 Orai1 的抑制未能降低 ATP 诱导的钙进入或 eNOS 激活。我们的研究结果表明，TRPC3 是 BAECs 中的一个储存操作通道，是 ATP 诱导的 eNOS 激活的关键调节因子，而流动刺激也将 TRPC4 募集到合成 NO 的途径中。TRPC1/6 或 Orai1 的抑制未能降低 ATP 诱导的钙进入或 eNOS 激活。我们的研究结果表明，TRPC3 是 BAECs 中的一个储存操作通道，是 ATP 诱导的 eNOS 激活的关键调节因子，而流动刺激也将 TRPC4 募集到合成 NO 的途径中。TRPC1/6 或 Orai1 的抑制未能降低 ATP 诱导的钙进入或 eNOS 激活。我们的研究结果表明，TRPC3 是 BAECs 中的一个储存操作通道，是 ATP 诱导的 eNOS 激活的关键调节因子，而流动刺激也将 TRPC4 募集到合成 NO 的途径中。