It is thought that maintaining preosteoblast viability is constructive to fracture healing. Here, we explored the effects of eupatilin on preosteoblast and addressed the mechanism associated with hsa_circ_0045714. Blood specimens were collected from 32 patients with hand fracture or calcaneus fracture. MC3T3-E1 cells were treated with eupatilin. Small interfering-RNA was transfected into MC3T3-E1 cells. The ability of MC3T3-E1 cells to survive, proliferate, migrate, and express fracture-associated proteins was examined by 3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide (MTT), 5-bromodeoxyuridine (BrdU), 24-Transwell, Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR), and Western blot. Hsa_circ_0045714 was detected by qRT-PCR. NF-κB and PI3K/AKT were evaluated by Western blot. Eupatilin enhanced the survival, proliferation, and migration of MC3T3-E1 cells. Cyclin D1, cyclin E, collagen II, aggrecan, and sulfated glycosaminoglycan (sGAG) were upregulated, while MMP-13 was downregulated in eupatilin-treated cells. Hsa_circ_0045714 was increased in patients with hand and calcaneus fractures with the time-lapse of surgical operation. In eupatilin-treated cells, Hsa_circ_0045714 was also elevated. However, the beneficial effects of eupatilin were weakened in hsa_circ_0045714-deficient cells. Molecularly, eupatilin-induced blockage of NF-κB and activation of PI3K/AKT were abrogated in hsa_circ_0045714-silenced cells. Our results confirmed the beneficial effects of eupatilin in preosteoblast, indicating eupatilin was a promising candidate for fracture healing.

中文翻译：

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eupatilin诱导的Hsa_circ_0045714具有促进骨折愈合的潜力

人们认为维持前成骨细胞活力对骨折愈合有建设性意义。在这里，我们探讨了 eupatilin 对前成骨细胞的影响，并解决了与 hsa_circ_0045714 相关的机制。从32名手部骨折或跟骨骨折患者中收集血液标本。MC3T3-E1 细胞用依帕替林处理。小干扰RNA被转染到MC3T3-E1细胞中。MC3T3-E1 细胞存活、增殖、迁移和表达骨折相关蛋白的能力通过 3-(4,5)-二甲基噻唑 (-z-y1)-3,5-diphenytetrazoliumromide (MTT) 检测， 5-溴脱氧尿苷 (BrdU)、24-Transwell、定量逆转录聚合酶链反应 (qRT-PCR) 和蛋白质印迹。通过 qRT-PCR 检测到 Hsa_circ_0045714。通过蛋白质印迹评估NF-κB和PI3K/AKT。Eupatilin 提高了存活率，MC3T3-E1 细胞的增殖和迁移。细胞周期蛋白 D1、细胞周期蛋白 E、胶原蛋白 II、蛋白聚糖和硫酸化糖胺聚糖 (sGAG) 被上调，而 MMP-13 在依帕替林处理的细胞中被下调。Hsa_circ_0045714 在手和跟骨骨折患者中随着手术时间的推移而增加。在经依帕替林处理的细胞中，Hsa_circ_0045714 也升高。然而，eupatilin 的有益作用在 hsa_circ_0045714 缺陷细胞中减弱。在分子上，eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。和硫酸化糖胺聚糖 (sGAG) 被上调，而 MMP-13 在 eupatilin 处理的细胞中被下调。Hsa_circ_0045714 在手和跟骨骨折患者中随着手术时间的推移而增加。在经依帕替林处理的细胞中，Hsa_circ_0045714 也升高。然而，eupatilin 的有益作用在 hsa_circ_0045714 缺陷细胞中减弱。在分子上，eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。和硫酸化糖胺聚糖 (sGAG) 被上调，而 MMP-13 在 eupatilin 处理的细胞中被下调。Hsa_circ_0045714 在手和跟骨骨折患者中随着手术时间的推移而增加。在经依帕替林处理的细胞中，Hsa_circ_0045714 也升高。然而，eupatilin 的有益作用在 hsa_circ_0045714 缺陷细胞中减弱。在分子上，eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。Hsa_circ_0045714 在手和跟骨骨折患者中随着手术时间的推移而增加。在经依帕替林处理的细胞中，Hsa_circ_0045714 也升高。然而，eupatilin 的有益作用在 hsa_circ_0045714 缺陷细胞中减弱。在分子上，eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。Hsa_circ_0045714 在手和跟骨骨折患者中随着手术时间的推移而增加。在经依帕替林处理的细胞中，Hsa_circ_0045714 也升高。然而，eupatilin 的有益作用在 hsa_circ_0045714 缺陷细胞中减弱。在分子上，eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。eupatilin 诱导的 NF-κB 阻断和 PI3K/AKT 激活在 hsa_circ_0045714 沉默的细胞中被废除。我们的结果证实了 eupatilin 在前成骨细胞中的有益作用，表明 eupatilin 是骨折愈合的有希望的候选者。