Influenza A virus (IAV) genomes comprise eight negative strand RNAs packaged into virions in the form of viral ribonucleoproteins (vRNPs). Rab11a plays a crucial role in the transport of vRNPs from the nucleus to the plasma membrane via microtubules, allowing assembly and virus production. Here, we identify a novel function for Rab11a in the inter-cellular transport of IAV vRNPs using tunneling nanotubes (TNTs) as molecular highways. TNTs are F-Actin rich tubules that link the cytoplasms of nearby cells. In IAV-infected cells, Rab11a was visualized together with vRNPs in these actin-rich intercellular connections. To better examine viral spread via TNTs, we devised an infection system in which conventional, virion-mediated, spread was not possible. Namely, we generated HA-deficient reporter viruses which are unable to produce progeny virions but whose genomes can be replicated and trafficked. In this system, vRNP transfer to neighboring cells was observed and this transfer was found to be dependent on both actin and Rab11a. Generation of infectious virus via TNT transfer was confirmed using donor cells infected with HA-deficient virus and recipient cells stably expressing HA protein. Mixing donor cells infected with genetically distinct IAVs furthermore revealed the potential for Rab11a and TNTs to serve as a conduit for genome mixing and reassortment in IAV infections. These data therefore reveal a novel role for Rab11a in the IAV life cycle, which could have significant implications for within-host spread, genome reassortment and immune evasion.

中文翻译：

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Rab11a 通过隧道纳米管介导 A 型流感病毒基因组的细胞间传播和重组。

甲型流感病毒 (IAV) 基因组包含以病毒核糖核蛋白 (vRNP) 形式包装到病毒粒子中的八种负链 RNA。Rab11a 在通过微管将 vRNP 从细胞核运输到质膜中起着至关重要的作用，从而允许组装和病毒生产。在这里，我们确定了 Rab11a 在使用隧道纳米管 (TNT) 作为分子高速公路的 IAV vRNPs 细胞间运输中的新功能。TNT 是富含 F-肌动蛋白的小管，连接附近细胞的细胞质。在 IAV 感染的细胞中，在这些富含肌动蛋白的细胞间连接中，Rab11a 与 vRNP 一起被可视化。为了更好地检查通过 TNT 传播的病毒，我们设计了一种感染系统，在该系统中，传统的、病毒粒子介导的传播是不可能的。即，我们生成了 HA 缺陷型报告病毒，这些病毒无法产生子代病毒粒子，但其基因组可以复制和贩运。在这个系统中，观察到 vRNP 转移到邻近细胞，发现这种转移依赖于肌动蛋白和 Rab11a。使用感染了 HA 缺陷病毒的供体细胞和稳定表达 HA 蛋白的受体细胞证实了通过 TNT 转移产生感染性病毒。混合感染基因不同 IAV 的供体细胞进一步揭示了 Rab11a 和 TNT 作为 IAV 感染中基因组混合和重配管道的潜力。因此，这些数据揭示了 Rab11a 在 IAV 生命周期中的新作用，这可能对宿主内传播、基因组重排和免疫逃避具有重要意义。在这个系统中，观察到 vRNP 转移到邻近细胞，发现这种转移依赖于肌动蛋白和 Rab11a。使用感染了 HA 缺陷病毒的供体细胞和稳定表达 HA 蛋白的受体细胞证实了通过 TNT 转移产生感染性病毒。混合感染基因不同 IAV 的供体细胞进一步揭示了 Rab11a 和 TNT 作为 IAV 感染中基因组混合和重配管道的潜力。因此，这些数据揭示了 Rab11a 在 IAV 生命周期中的新作用，这可能对宿主内传播、基因组重排和免疫逃避具有重要意义。在这个系统中，观察到 vRNP 转移到邻近细胞，发现这种转移依赖于肌动蛋白和 Rab11a。使用感染了 HA 缺陷病毒的供体细胞和稳定表达 HA 蛋白的受体细胞证实了通过 TNT 转移产生感染性病毒。混合感染基因不同 IAV 的供体细胞进一步揭示了 Rab11a 和 TNT 作为 IAV 感染中基因组混合和重配管道的潜力。因此，这些数据揭示了 Rab11a 在 IAV 生命周期中的新作用，这可能对宿主内传播、基因组重排和免疫逃避具有重要意义。使用感染了 HA 缺陷病毒的供体细胞和稳定表达 HA 蛋白的受体细胞证实了通过 TNT 转移产生感染性病毒。混合感染基因不同 IAV 的供体细胞进一步揭示了 Rab11a 和 TNT 作为 IAV 感染中基因组混合和重配管道的潜力。因此，这些数据揭示了 Rab11a 在 IAV 生命周期中的新作用，这可能对宿主内传播、基因组重排和免疫逃避具有重要意义。使用感染了 HA 缺陷病毒的供体细胞和稳定表达 HA 蛋白的受体细胞证实了通过 TNT 转移产生感染性病毒。混合感染基因不同 IAV 的供体细胞进一步揭示了 Rab11a 和 TNT 作为 IAV 感染中基因组混合和重配管道的潜力。因此，这些数据揭示了 Rab11a 在 IAV 生命周期中的新作用，这可能对宿主内传播、基因组重排和免疫逃避具有重要意义。