Receptor-interacting protein kinase 3 (RIPK3) is a multifunctional intracellular protein that was first recognized as an important component of the necroptosis programmed cell death pathway. RIPK3 is also highly expressed in non-necroptotic murine embryonic endothelial cells (ECs) during vascular development, indicating its potential contribution to angiogenesis. To test this hypothesis, we generated mice lacking endothelial RIPK3 and found non-lethal embryonic and perinatal angiogenesis defects in multiple vascular beds. Our in vitro data indicate that RIPK3 supports angiogenesis by regulating growth factor receptor degradation in ECs. We found that RIPK3 interacted with the membrane trafficking protein myoferlin to sustain expression of vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR2) in cultured ECs following vascular endothelial growth factor A (VEGFA) stimulation. Restoration of myoferlin, which was diminished after RIPK3 knockdown, rescued decreased VEGFR2 expression and vascular sprouting in RIPK3-deficient ECs after VEGFA treatment. In addition, we found that RIPK3 modulated expression of genes involved in endothelial identity by inhibiting ERK signaling independently of growth factor receptor turnover. Altogether, our data reveal unexpected non-necroptotic roles for RIPK3 in ECs and evidence that RIPK3 promotes developmental angiogenesis in vivo.

受体相互作用蛋白激酶 3 (RIPK3) 是一种多功能细胞内蛋白，最初被认为是坏死性凋亡程序性细胞死亡途径的重要组成部分。RIPK3 在血管发育过程中也在非坏死性小鼠胚胎内皮细胞 (ECs) 中高度表达，表明其对血管生成的潜在贡献。为了验证这一假设，我们生成了缺乏内皮 RIPK3 的小鼠，并在多个血管床中发现了非致命的胚胎和围产期血管生成缺陷。我们的体外数据表明，RIPK3 通过调节 EC 中的生长因子受体降解来支持血管生成。我们发现 RIPK3 与膜转运蛋白肌铁蛋白相互作用，以维持血管内皮生长因子 A (VEGFA) 刺激后培养的 ECs 中血管内皮生长因子受体 2 (VEGFR2) 的表达。在 RIPK3 敲低后肌铁蛋白的恢复，在 VEGFA 治疗后挽救了 RIPK3 缺陷型 ECs 中 VEGFR2 表达和血管发芽的降低。此外，我们发现 RIPK3 通过独立于生长因子受体转换抑制 ERK 信号传导来调节参与内皮特性的基因的表达。总之，我们的数据揭示了 RIPK3 在 ECs 中意想不到的非坏死性凋亡作用，以及 RIPK3 促进体内发育性血管生成的证据。在 VEGFA 治疗后，在 RIPK3 缺陷型 ECs 中，VEGFR2 表达和血管发芽减少。此外，我们发现 RIPK3 通过独立于生长因子受体转换抑制 ERK 信号传导来调节参与内皮特性的基因的表达。总之，我们的数据揭示了 RIPK3 在 ECs 中意想不到的非坏死性凋亡作用，以及 RIPK3 促进体内发育性血管生成的证据。在 VEGFA 治疗后，在 RIPK3 缺陷型 ECs 中，VEGFR2 表达和血管发芽减少。此外，我们发现 RIPK3 通过独立于生长因子受体转换抑制 ERK 信号传导来调节参与内皮特性的基因的表达。总之，我们的数据揭示了 RIPK3 在 ECs 中意想不到的非坏死性凋亡作用，以及 RIPK3 促进体内发育性血管生成的证据。