A comparative canine–human therapeutics model is being developed in B-cell lymphoma through the generation of a hybridoma cell that produces a murine monoclonal antibody specific for canine CD20. The hybridoma cell produces two light chains, light chain-3, and light chain-7. However, the contribution of either light chain to the authentic full-length hybridoma derived IgG is undefined. Mass spectrometry was used to identify only one of the two light chains, light chain-7, as predominating in the full-length IgG. Gene synthesis created a recombinant murine–canine chimeric monoclonal antibody expressing light chain-7 that reconstituted the IgG binding to CD20. Using light chain-7 as a reference sequence, hydrogen deuterium exchange mass spectrometry was used to identify the dominant CDR region implicated in CD20 antigen binding. Early in the deuteration reaction, the CD20 antigen suppressed deuteration at CDR3 (VH). In later time points, deuterium suppression occurred at CDR2 (VH) and CDR2 (VL), with the maintenance of the CDR3 (VH) interaction. These data suggest that CDR3 (VH) functions as the dominant antigen docking motif and that antibody aggregation is induced at later time points after antigen binding. These approaches define a methodology for fine mapping of CDR contacts using nested enzymatic reactions and hydrogen deuterium exchange mass spectrometry. These data support the further development of an engineered, synthetic canine–murine monoclonal antibody, focused on CDR3 (VH), for use as a canine lymphoma therapeutic that mimics the human–murine chimeric anti-CD20 antibody Rituximab.

中文翻译：

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氢氘交换质谱法鉴定CD20抗原与NCD1.2单克隆抗体结合的主要互补位

通过产生可产生犬CD20特异性鼠单克隆抗体的杂交瘤细胞，正在B细胞淋巴瘤中建立犬-人比较治疗模型。杂交瘤细胞产生两条轻链，轻链3和轻链7。然而，两条轻链对真正的全长杂交瘤衍生的IgG的贡献尚不确定。质谱法仅用于鉴定两条轻链中的一条，即轻链7，在全长IgG中占主导地位。基因合成产生了表达轻链7的重组鼠-犬嵌合单克隆抗体，该抗体重建了IgG与CD20的结合。使用轻链7作为参考序列，氢氘交换质谱法用于鉴定与CD20抗原结合有关的显性CDR区。在氘反应的早期，CD20抗原抑制了CDR3（VH）的氘。在以后的时间点，氘的抑制作用发生在CDR2（VH）和CDR2（VL）上，并保持了CDR3（VH）相互作用。这些数据表明，CDR3（VH）作为主要的抗原对接基序，并且在抗原结合后的较晚时间点诱导抗体聚集。这些方法定义了使用嵌套式酶促反应和氢氘交换质谱对CDR接触进行精细定位的方法。这些数据支持了针对CDR3（VH）的工程化合成犬-鼠单克隆抗体的进一步开发，该抗体可用作模仿人-鼠嵌合抗CD20抗体利妥昔单抗的犬淋巴瘤治疗剂。在以后的时间点，氘的抑制作用在CDR2（VH）和CDR2（VL）处发生，并保持了CDR3（VH）相互作用。这些数据表明，CDR3（VH）作为主要的抗原对接基序，并且在抗原结合后的较晚时间点诱导抗体聚集。这些方法定义了使用嵌套式酶促反应和氢氘交换质谱对CDR接触进行精细定位的方法。这些数据支持了针对CDR3（VH）的工程化合成犬-鼠单克隆抗体的进一步开发，该抗体可用作模仿人-鼠嵌合抗CD20抗体利妥昔单抗的犬淋巴瘤治疗剂。在以后的时间点，氘的抑制作用在CDR2（VH）和CDR2（VL）处发生，并保持了CDR3（VH）相互作用。这些数据表明，CDR3（VH）作为主要的抗原对接基序，并且在抗原结合后的较晚时间点诱导抗体聚集。这些方法定义了使用嵌套式酶促反应和氢氘交换质谱对CDR接触进行精细定位的方法。这些数据支持了针对CDR3（VH）的工程化合成犬-鼠单克隆抗体的进一步开发，该抗体可用作模仿人-鼠嵌合抗CD20抗体利妥昔单抗的犬淋巴瘤治疗剂。这些数据表明，CDR3（VH）作为主要的抗原对接基序，并且在抗原结合后的较晚时间点诱导抗体聚集。这些方法定义了使用嵌套式酶促反应和氢氘交换质谱对CDR接触进行精细定位的方法。这些数据支持了针对CDR3（VH）的工程化合成犬-鼠单克隆抗体的进一步开发，该抗体可用作模仿人-鼠嵌合抗CD20抗体利妥昔单抗的犬淋巴瘤治疗剂。这些数据表明，CDR3（VH）作为主要的抗原对接基序，并且在抗原结合后的较晚时间点诱导抗体聚集。这些方法定义了使用嵌套式酶促反应和氢氘交换质谱对CDR接触进行精细定位的方法。这些数据支持了针对CDR3（VH）的工程化合成犬-鼠单克隆抗体的进一步开发，该抗体可用作模仿人-鼠嵌合抗CD20抗体利妥昔单抗的犬淋巴瘤治疗剂。