Breast cancer is a disease in which cell grows rapidly forming a mass in the breast. HER2 polymorphisms Ile655Val have been studied as biomarkers for breast cancer and may comprise a risk factor of cardiac toxicity for breast cancer-consuming trastuzumab. Aim of work: In this study, we developed a simple, low cost, and rapid test to detect polymorphism at HER2 gene using SYBR Green I-based melting curve method. In this report, we performed allelic discrimination with real-time temperature melting (Tm) Shift SYBR Green I-based melting curve method. The melting profiles of amplified DNA HER-2 Ile655Val and its characteristics were analyzed. Tm value of HER2 GG and AA alleles were 85 ± 0.14 °C and 82.5 ± 0.23 °C, respectively, while cycle threshold (Ct) value of GG, AG, and AA alleles were 19.6 ± 0.27, 22.5 ± 0.23, 18.6 ± 0.22 correspondingly; furthermore, no template control has shown consisting Ct value at 31.18 ± 0.27. The developed methods’ characteristics were optimum annealing at 62 °C and Kappa coefficient value 1 with the mean almost consistent with PCR-sequencing. The coefficient of variability for intra-assay of GG, AG, and AA was in the range of 0.2–1%, while the coefficient of variability for inter-assay for each were in the range 0.7–1%. Further, based on PCR, shelf-life assay has shown stability for 3 months of storage observation. This approach may be considered as simple, rapid, and low cost supporting the rapid study of HER2 epidemiology. Furthermore, the developed methods potentially facilitate clinicians in dealing with breast cancer patients, especially in considering about the cardiotoxicity effect of trastuzumab.

中文翻译：

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基于SYBR Green I的融解曲线方法的设计和表征，用于研究乳腺癌HER2I655V多态性

乳腺癌是一种细胞迅速生长并在乳房中形成肿块的疾病。HER2多态性Ile655Val已作为乳腺癌的生物标志物进行了研究，可能对食用乳腺癌的曲妥珠单抗构成心脏毒性的危险因素。工作目的：在这项研究中，我们开发了一种简单，低成本且快速的测试，以基于SYBR Green I的熔解曲线方法检测HER2基因的多态性。在本报告中，我们使用基于实时温度融解（Tm）的SYBR Green I融解曲线方法进行了等位基因识别。分析了扩增的DNA HER-2 Ile655Val的熔解图谱及其特性。HER2 GG和AA等位基因的Tm值分别为85±0.14°C和82.5±0.23°C，而GG，AG和AA等位基因的循环阈值（Ct）分别为19.6±0.27、22.5±0.23、18.6±0.22相应地 此外，没有模板对照显示Ct值为31.18±0.27。所开发方法的特征是在62°C时的最佳退火和Kappa系数值为1，其平均值几乎与PCR序列一致。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。没有模板控件显示Ct值为31.18±0.27。所开发方法的特征是在62°C时的最佳退火和Kappa系数值为1，其平均值几乎与PCR序列一致。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。没有模板控件显示Ct值为31.18±0.27。所开发方法的特征是在62°C时的最佳退火和Kappa系数值为1，其平均值几乎与PCR序列一致。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。所开发方法的特征是在62°C时的最佳退火和Kappa系数值为1，其平均值几乎与PCR序列一致。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。所开发方法的特征是在62°C时的最佳退火和Kappa系数值为1，其平均值几乎与PCR序列一致。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。GG，AG和AA的批内变异性系数在0.2-1％的范围内，而每种批间的变异性系数在0.7-1％的范围内。此外，基于PCR，保质期分析显示了3个月的储存稳定性。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。这种方法可被视为支持HER2流行病学快速研究的简单，快速和低成本的方法。此外，已开发的方法可能会方便临床医生处理乳腺癌患者，尤其是考虑曲妥珠单抗的心脏毒性作用。