The goal of this study was to determine the expression and distribution of the host restriction factors (RFs) TRIM5α and TRIM11 in non-human primate (NHP) neural retina tissue and the human Muller cell line MIO-M1. In addition, experiments were performed to determine the effect of TRIM5α and TRIM11 knockdown on FIVGFP transduction of MIO-M1 cells with the goal of devising strategies to increase the efficiency of lentiviral (LV) gene delivery. Immunofluorescence (IF) studies indicated that TRIM5α and TRIM11 were localized predominantly in nuclei within the outer nuclear layer (ONL) and inner nuclear layer (INL) of NHP retina tissue. Double label IF indicated that TRIM5α and TRIM11 were localized to some of the retinal Muller cell nuclei. MIO-M1 cells expressed TRIM5α predominantly in the nucleus and TRIM11 primarily in the cytosol. FIVGFP transduction efficiency was significantly increased, at 4 and 7 days post transduction, in TRIM5α and TRIM11 knockdown clones (KD) compared to WT MIO-M1 cells. In addition, pretreatment with the proteasome inhibitor MG132 increased the transduction efficiency of FIVGFP in WT MIO-M1 cells. The nuclear translocation of NF-κB (p65), at 72 h post FIVGFP transduction, was enhanced in TRIM5α and TRIM11 KD clones. The expression of TRIM5α and TRIM11 in macaque neural retina tissue and MIO-M1 cells indicate the presence of these RFs in NHP retina and human Muller cells. Our data indicate that even partial knockdown of TRIM5α or TRIM11, or a short proteasome inhibitor pretreatment, can increase the transduction efficiency of a LV vector.

本研究的目的是确定宿主限制因子 (RFs) TRIM5α 和 TRIM11 在非人灵长类动物 (NHP) 神经视网膜组织和人穆勒细胞系 MIO-M1 中的表达和分布。此外，还进行了实验以确定 TRIM5α 和 TRIM11 敲低对 MIO-M1 细胞的 FIVGFP 转导的影响，目的是设计提高慢病毒 (LV) 基因传递效率的策略。免疫荧光 (IF) 研究表明，TRIM5α 和 TRIM11 主要位于 NHP 视网膜组织的外核层 (ONL) 和内核层 (INL) 内的细胞核中。双标 IF 表明 TRIM5α 和 TRIM11 定位于一些视网膜穆勒细胞核。MIO-M1 细胞主要在细胞核中表达 TRIM5α，而 TRIM11 主要在细胞质中表达。与 WT MIO-M1 细胞相比，在转导后 4 天和 7 天，TRIM5α 和 TRIM11 敲低克隆 (KD) 中的 FIVGFP 转导效率显着提高。此外，用蛋白酶体抑制剂 MG132 预处理增加了 FIVGFP 在 WT MIO-M1 细胞中的转导效率。在 FIVGFP 转导后 72 小时，NF-κB (p65) 的核转位在 TRIM5α 和 TRIM11 KD 克隆中增强。TRIM5α 和 TRIM11 在猕猴神经视网膜组织和 MIO-M1 细胞中的表达表明这些 RF 在 NHP 视网膜和人 Muller 细胞中的存在。我们的数据表明，即使部分敲低 TRIM5α 或 TRIM11，或短暂的蛋白酶体抑制剂预处理，也可以提高 LV 载体的转导效率。与 WT MIO-M1 细胞相比，在 TRIM5α 和 TRIM11 敲低克隆 (KD) 中。此外，用蛋白酶体抑制剂 MG132 预处理增加了 FIVGFP 在 WT MIO-M1 细胞中的转导效率。在 FIVGFP 转导后 72 小时，NF-κB (p65) 的核转位在 TRIM5α 和 TRIM11 KD 克隆中增强。TRIM5α 和 TRIM11 在猕猴神经视网膜组织和 MIO-M1 细胞中的表达表明这些 RF 在 NHP 视网膜和人 Muller 细胞中的存在。我们的数据表明，即使部分敲低 TRIM5α 或 TRIM11，或短暂的蛋白酶体抑制剂预处理，也可以提高 LV 载体的转导效率。与 WT MIO-M1 细胞相比，在 TRIM5α 和 TRIM11 敲低克隆 (KD) 中。此外，用蛋白酶体抑制剂 MG132 预处理增加了 FIVGFP 在 WT MIO-M1 细胞中的转导效率。在 FIVGFP 转导后 72 小时，NF-κB (p65) 的核转位在 TRIM5α 和 TRIM11 KD 克隆中增强。TRIM5α 和 TRIM11 在猕猴神经视网膜组织和 MIO-M1 细胞中的表达表明这些 RF 在 NHP 视网膜和人 Muller 细胞中的存在。我们的数据表明，即使部分敲低 TRIM5α 或 TRIM11，或短暂的蛋白酶体抑制剂预处理，也可以提高 LV 载体的转导效率。在 FIVGFP 转导后 72 小时，在 TRIM5α 和 TRIM11 KD 克隆中增强。TRIM5α 和 TRIM11 在猕猴神经视网膜组织和 MIO-M1 细胞中的表达表明这些 RF 在 NHP 视网膜和人 Muller 细胞中的存在。我们的数据表明，即使部分敲低 TRIM5α 或 TRIM11，或短暂的蛋白酶体抑制剂预处理，也可以提高 LV 载体的转导效率。在 FIVGFP 转导后 72 小时，在 TRIM5α 和 TRIM11 KD 克隆中增强。TRIM5α 和 TRIM11 在猕猴神经视网膜组织和 MIO-M1 细胞中的表达表明这些 RF 在 NHP 视网膜和人 Muller 细胞中的存在。我们的数据表明，即使部分敲低 TRIM5α 或 TRIM11，或短暂的蛋白酶体抑制剂预处理，也可以提高 LV 载体的转导效率。