The Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama, transmits the bacteria Candidatus Liberibacter associated with huanglongbing (HLB), a devastating disease of the citrus industry. The use of genetically modified plants is an alternative to control this vector. Conversely, technology based on RNA interference (RNAi) for silencing specific genes of a target insect could be attempted. This work evaluated the knockdown effect of the target genes calreticulin (DcCRT), laccase (DcLAC), and Snf7 (DcSnf7) by RNAi through feeding D. citri in Murraya paniculata leaves after the uptake of an aqueous solution with dsRNA homologous to each vector target gene. Confocal microscopy revealed the uptake of the fluorescent-labeled dsRNA by detached leaves and the symplastic movement, allowing the ingestion by the feeding insect. A reduction in the survival rate was observed only 144 h after the beginning of feeding with dsRNA targeting DcSnf7; however, no reduction in transcript accumulation. The knockdown of the DcCRT and DcLAC genes was detected only 12 and 96 h after insect feeding, respectively. Additionally, a reduction in amino acid excretion from insects fed with dsRNA targets to DcCRT and DcLAC was observed 120 h after the beginning of feeding. However, the effects of the dsRNAs tested here appear to be minimal, both at the transcriptional and phenotype levels. For most concentrations and time points, no effects were observed. Therefore, the knockdown of genes DcCRT, DcLAC, and DcSnf7 do not appear to have the potential to control of D. citri through RNAi-mediated gene silencing.

中文翻译：

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通过 RNAi 敲除钙网蛋白、漆酶和 Snf7 基因对控制亚洲柑橘木虱（半翅目：李子科）无效

亚洲柑橘木虱，Diaphorina citri Kuwayama，传播与黄龙病（HLB）相关的细菌Candidatus Liberibacter，黄龙病是柑橘产业的一种毁灭性疾病。使用转基因植物是控制该载体的替代方法。相反，可以尝试基于 RNA 干扰 (RNAi) 的技术来沉默目标昆虫的特定基因。这项工作通过在 Murraya paniculata 叶子中喂养柑橘叶霉，在吸收了与每个载体靶标同源的 dsRNA 的水溶液后，通过 RNAi 评估了靶基因钙网蛋白 (DcCRT)、漆酶 (DcLAC) 和 Snf7 (DcSnf7) 的敲低效果基因。共聚焦显微镜揭示了分离的叶子和共生运动对荧光标记的 dsRNA 的吸收，从而允许进食昆虫摄取。在开始喂食靶向 DcSnf7 的 dsRNA 后仅 144 小时观察到存活率降低；然而，转录本积累并没有减少。DcCRT 和 DcLAC 基因的敲低分别在昆虫喂养后 12 小时和 96 小时检测到。此外，在开始喂食后 120 小时观察到，喂食了 DcCRT 和 DcLAC 的 dsRNA 靶点的昆虫的氨基酸排泄减少。然而，这里测试的 dsRNAs 在转录和表型水平上的影响似乎很小。对于大多数浓度和时间点，没有观察到影响。因此，基因 DcCRT、DcLAC 和 DcSnf7 的敲低似乎没有通过 RNAi 介导的基因沉默来控制柑橘果蝇的潜力。然而，转录本积累并没有减少。DcCRT 和 DcLAC 基因的敲低分别在昆虫喂养后 12 小时和 96 小时检测到。此外，在开始喂食后 120 小时观察到，喂食了 DcCRT 和 DcLAC 的 dsRNA 靶点的昆虫的氨基酸排泄减少。然而，这里测试的 dsRNAs 在转录和表型水平上的影响似乎很小。对于大多数浓度和时间点，没有观察到影响。因此，基因 DcCRT、DcLAC 和 DcSnf7 的敲低似乎没有通过 RNAi 介导的基因沉默来控制柑橘果蝇的潜力。然而，转录本积累并没有减少。DcCRT 和 DcLAC 基因的敲低分别在昆虫喂养后 12 小时和 96 小时检测到。此外，在开始喂食后 120 小时观察到，喂食了 DcCRT 和 DcLAC 的 dsRNA 靶点的昆虫的氨基酸排泄减少。然而，这里测试的 dsRNAs 在转录和表型水平上的影响似乎很小。对于大多数浓度和时间点，没有观察到影响。因此，基因 DcCRT、DcLAC 和 DcSnf7 的敲低似乎没有通过 RNAi 介导的基因沉默来控制柑橘果蝇的潜力。在开始喂食后 120 小时，观察到用 dsRNA 靶标喂养到 DcCRT 和 DcLAC 的昆虫的氨基酸排泄减少。然而，这里测试的 dsRNAs 在转录和表型水平上的影响似乎很小。对于大多数浓度和时间点，没有观察到影响。因此，基因 DcCRT、DcLAC 和 DcSnf7 的敲低似乎没有通过 RNAi 介导的基因沉默来控制柑橘果蝇的潜力。在开始喂食后 120 小时，观察到用 dsRNA 靶标喂养到 DcCRT 和 DcLAC 的昆虫的氨基酸排泄减少。然而，这里测试的 dsRNAs 在转录和表型水平上的影响似乎很小。对于大多数浓度和时间点，没有观察到影响。因此，基因 DcCRT、DcLAC 和 DcSnf7 的敲低似乎没有通过 RNAi 介导的基因沉默来控制柑橘果蝇的潜力。