Phosphatidylethanol (PEth), which is formed by enzymatic reaction between ethanol and phosphatidylcholine, is a direct marker for alcohol usage. PEth has a long elimination half-life (~5–10 d) and specimens can be sampled using minimally invasive microsampling strategies. In combination with rapid analysis procedures PEth has proved to be advantageous for the detection of abstinence over other direct (e.g., ethyl glucuronide in blood, urine or hair) and indirect (e.g., carbohydrate-deficient transferrin in serum) alcohol markers. Although PEth determination is widely applied around the world, laboratory protocols are not standardized. Here we provide general guidelines for the analysis of PEth in dried blood spots (DBSs), including reference material evaluation, synthesis of a deuterated internal standard, preparation of calibration samples (reference material in teetotaller blood), and analyte separation and detection. The protocol contains information to extract the DBSs either manually or with a fully automated autosampler. Extraction of the analytes from DBS filter paper cards is performed using an organic extraction, followed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC–MS/MS). For accurate and reliable measurement of PEth, the two most abundant analogs, PEth 16:0/18:1 and PEth 16:0/18:2, are quantified. We show data that provide guidelines on how to interpret the results for both demographic studies and forensic applications. The described protocol can be applied by experienced laboratory staff with basic LC–MS/MS knowledge and takes 2 d to perform.

磷脂酰乙醇 (PEth) 由乙醇和磷脂酰胆碱之间的酶促反应形成，是酒精使用的直接标志物。PEth 具有较长的消除半衰期（约 5-10 天），并且可以使用微创微量采样策略对样本进行采样。与快速分析程序相结合，PEth 已证明比其他直接（例如血液、尿液或头发中的乙基葡糖苷酸）和间接（例如血清中缺乏碳水化合物的转铁蛋白）酒精标志物检测禁欲更有利。尽管 PEth 测定在世界范围内得到广泛应用，但实验室协议并未标准化。在这里，我们提供了用于分析干血斑 (DBS) 中 PEth 的一般指南，包括参考材料评估、氘代内标的合成、校准样品的制备（滴酒不沾血中的参考物质），以及分析物的分离和检测。该协议包含手动或使用全自动自动进样器提取 DBS 的信息。使用有机萃取法从 DBS 滤纸卡中提取分析物，然后进行液相色谱与串联质谱联用 (LC-MS/MS)。为了准确可靠地测量 PEth，对两种最丰富的类似物 PEth 16:0/18:1 和 PEth 16:0/18:2 进行了量化。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。该协议包含手动或使用全自动自动进样器提取 DBS 的信息。使用有机萃取法从 DBS 滤纸卡中提取分析物，然后进行液相色谱与串联质谱联用 (LC-MS/MS)。为了准确可靠地测量 PEth，对两种最丰富的类似物 PEth 16:0/18:1 和 PEth 16:0/18:2 进行了量化。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。该协议包含手动或使用全自动自动进样器提取 DBS 的信息。使用有机萃取法从 DBS 滤纸卡中提取分析物，然后进行液相色谱与串联质谱联用 (LC-MS/MS)。为了准确可靠地测量 PEth，对两种最丰富的类似物 PEth 16:0/18:1 和 PEth 16:0/18:2 进行了量化。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。使用有机萃取法从 DBS 滤纸卡中提取分析物，然后进行液相色谱与串联质谱联用 (LC-MS/MS)。为了准确可靠地测量 PEth，对两种最丰富的类似物 PEth 16:0/18:1 和 PEth 16:0/18:2 进行了量化。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。使用有机萃取法从 DBS 滤纸卡中提取分析物，然后进行液相色谱与串联质谱联用 (LC-MS/MS)。为了准确可靠地测量 PEth，对两种最丰富的类似物 PEth 16:0/18:1 和 PEth 16:0/18:2 进行了量化。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。我们展示的数据为如何解释人口统计研究和法医应用的结果提供了指导。所描述的协议可由具有基本 LC-MS/MS 知识的经验丰富的实验室工作人员应用，并且需要 2 天才能执行。