To investigate the role of N6-methyladenosine (m6A) RNA modification in the pathogenesis of Graves' ophthalmopathy (GO). Surgically excised extraocular muscles from 7 patients with GO and 5 subjects without GO were used. The global m6A levels in the specimens were determined using an m6A RNA methylation quantification kit. RNA sequencing (RNA-seq) was used to analyze the molecules involved in the regulation of m6A RNA methylation and the differential expression of mRNAs between the two groups (4 eyes, respectively). The expression of m6A RNA modification genes was evaluated by real-time PCR. The functional implications of the gene alterations between the GO and control specimens were determined by Gene Ontology analysis. The m6A level was significantly increased in the specimens of GO patients compared to the control specimens (P < 0.05). The expression of m6A methylation regulators, such as WT1 associated protein (WTAP), alkylation repair homolog protein 5 (ALKBH5), E74 like ETS transcription factor 3 (ELF3), YTH N6-methyladenosine RNA binding protein 2 (YTHDF2), YTHDF3 and YTH domain containing 2 (YTHDC2), was significantly upregulated (P < 0.05). Gene Ontology enrichment analysis showed that the most highly upregulated genes and biological pathways were related to the immune response and inflammatory processes such as lymphocyte activation, leukocyte differentiation, cytokine production and cytokine-mediated signaling pathways. Our results suggest that m6A methylation may play a critical role in the pathogenesis of GO and that targeting genes that regulate m6A methylation may provide a new therapeutic approach for GO.

中文翻译：

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m ⁶ A甲基化在Graves眼病发病机理中的关键作用

调查N6-甲基腺苷（m6A）RNA修饰在Graves眼病（GO）发病机理中的作用。使用了7例GO患者和5例非GO患者的手术切除眼外肌。使用m6A RNA甲基化定量试剂盒确定样品中的总体m6A水平。RNA测序（RNA-seq）用于分析参与调节m6A RNA甲基化的分子以及两组之间mRNA的差异表达（分别为4只眼）。通过实时PCR评估m6A RNA修饰基因的表达。通过基因本体分析确定GO和对照样品之间的基因改变的功能含义。与对照组相比，GO患者的m6A水平显着升高（P <0.05）。m6A甲基化调节剂的表达，例如WT1相关蛋白（WTAP），烷基化修复同源蛋白5（ALKBH5），ETS转录因子3（ELF3）等E74，YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2（YTHDF2），YTHDF3和YTH包含2（YTHDC2）的蛋白域显着上调（P <0.05）。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，例如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。例如WT1相关蛋白（WTAP），烷基化修复同源蛋白5（ALKBH5），E74如ETS转录因子3（ELF3），YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2（YTHDF2），YTHDF3和包含2的YTH结构域（YTHDC2），明显上调（P <0.05）。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。例如WT1相关蛋白（WTAP），烷基化修复同源蛋白5（ALKBH5），E74如ETS转录因子3（ELF3），YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2（YTHDF2），YTHDF3和包含2的YTH结构域（YTHDC2），明显上调（P <0.05）。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，例如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。E74如ETS转录因子3（ELF3），YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2（YTHDF2），YTHDF3和包含2的YTH结构域（YTHDC2）被显着上调（P <0.05）。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，例如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。E74如ETS转录因子3（ELF3），YTH N6-甲基腺苷RNA结合蛋白2（YTHDF2），YTHDF3和包含2的YTH结构域（YTHDC2）被显着上调（P <0.05）。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，例如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，例如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。基因本体论富集分析表明，上调程度最高的基因和生物学途径与免疫应答和炎症过程有关，例如淋巴细胞活化，白细胞分化，细胞因子产生和细胞因子介导的信号传导途径。我们的结果表明，m6A甲基化可能在GO的发病机理中起关键作用，而靶向调控m6A甲基化的基因可能为GO提供新的治疗方法。