Exosomes are the nanoscopic lipid bi-layered extracellular vesicles with the potential to be utilized as targeted therapeutics. In our investigation, we compared three major exosome isolation techniques that were Total Exosome Isolation reagent (TEI), Protein organic solvent precipitation (PROSPR) and differential ultracentrifugation (UC) based on the biophysical and physicochemical characteristics of exosomes isolated from COLO 205 and MCF-7 cancer cell's conditioned media with an aim to select a suitable method for translational studies. 3D image analysis and particle size distribution of exosomes from their HRTEM images depicted the morphological differences. Molecular and analytical characterization of exosomes using western blotting, Raman and ATR-FTIR spectroscopy and the multivariate analysis on the spectral data obtained, assessed for better molecular specifications and purity of particle. TEI method isolated exosomes with higher exosomal yield, purity, and recovery directly translatable into drug delivery and targeted therapeutics whereas ultracentrifuge had good recovery of particle morphology but showed particle aggregation and yielded exosomes with smaller mean size. PROSPR technique isolated a mixture of EVs, showed lower protein recovery in PAGE and western blotting but higher spectroscopic protein to lipid ratio and distinguishable EV population in multivariate analysis compared to exosomes isolated by TEI and UC. This comparative study should help in choosing a specific exosome isolation technique required for the objective of downstream applications.

外泌体是纳米脂质双层细胞外囊泡，具有用作靶向治疗剂的潜力。在我们的调查中，我们根据从COLO 205和MCF-205分离的外泌体的生物物理和理化特性，比较了三种主要的外泌体分离技术：总外泌体分离试剂（TEI），蛋白质有机溶剂沉淀（PROSPR）和差异超速离心（UC）。 7种癌细胞的条件培养基，旨在为翻译研究选择合适的方法。从其HRTEM图像进行的3D图像分析和外泌体的粒径分布描述了形态差异。使用Western印迹，拉曼光谱和ATR-FTIR光谱对外泌体进行分子和分析表征，并对获得的光谱数据进行多元分析，经评估具有更好的分子规格和颗粒纯度。TEI方法分离的外泌体具有更高的外泌体产量，纯度和回收率，可直接转化为药物递送和靶向治疗，而超速离心机具有良好的颗粒形态恢复能力，但显示出颗粒聚集并产生平均大小较小的外泌体。与TEI和UC分离的外泌体相比，PROSPR技术分离出了EV的混合物，在PAGE和Western印迹中显示出较低的蛋白质回收率，但在多变量分析中显示出更高的光谱蛋白/脂质比率和可区分的EV群体。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。TEI方法分离的外泌体具有更高的外泌体产量，纯度和回收率，可直接转化为药物递送和靶向治疗，而超速离心机具有良好的颗粒形态恢复能力，但显示出颗粒聚集并产生平均大小较小的外泌体。与TEI和UC分离的外泌体相比，PROSPR技术分离出了EV的混合物，在PAGE和Western印迹中显示出较低的蛋白质回收率，但在多变量分析中显示出更高的光谱蛋白/脂质比率和可区分的EV群体。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。TEI方法分离的外泌体具有更高的外泌体产量，纯度和回收率，可直接转化为药物递送和靶向治疗，而超速离心机具有良好的颗粒形态恢复能力，但显示出颗粒聚集并产生平均大小较小的外泌体。与TEI和UC分离的外泌体相比，PROSPR技术分离出了EV的混合物，在PAGE和Western印迹中显示出较低的蛋白质回收率，但在多变量分析中显示出更高的光谱蛋白/脂质比率和可区分的EV群体。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。回收率和回收率可直接转化为药物输送和靶向治疗，而超速离心机具有良好的颗粒形态恢复能力，但显示出颗粒聚集并产生平均大小较小的外泌体。与TEI和UC分离的外泌体相比，PROSPR技术分离出了EV的混合物，在PAGE和Western印迹中显示出较低的蛋白质回收率，但在多变量分析中显示出更高的光谱蛋白/脂质比率和可区分的EV群体。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。回收率和回收率可直接转化为药物递送和靶向治疗，而超速离心机具有良好的颗粒形态恢复能力，但显示出颗粒聚集并产生平均大小较小的外泌体。与TEI和UC分离的外泌体相比，PROSPR技术分离出了EV的混合物，在PAGE和Western印迹中显示出较低的蛋白质回收率，但在多变量分析中显示出更高的光谱蛋白/脂质比率和可区分的EV群体。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。与通过TEI和UC分离的外泌体相比，在多变量分析中，PAGE和Western印迹显示较低的蛋白质回收率，但较高的光谱蛋白/脂质比率和可分辨的EV群体。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。与通过TEI和UC分离的外泌体相比，在多变量分析中显示的PAGE和Western印迹法中蛋白质回收率较低，但光谱蛋白/脂质比较高，可区分的EV群体更高。这项比较研究应有助于选择下游应用目标所需的特定外泌体分离技术。