Ferroptosis is regulated, non-apoptotic cell death in which ferrous iron and lipid peroxidation products play essential roles. While the ferroptotic pathway is now becoming unveiled, it is difficult to determine its involvement in situ because no unique marker for ferroptotic cells is known. In this study, we report on raising a rat monoclonal antibody against mouse-derived Hepa 1–6 cells that had been cultivated in cystine-deprived media. Binding of the resulting antibody, designated as FerAb, increased during advancing ferroptosis which was caused, not only by cystine deprivation but also treatment with erastin or RSL3, while apoptotic cell death induced by a staurosporine treatment had no effect on the binding. The FerAb was found to bind to 4-hydroxy-2-nonenal (HNE)-modified bovine serum albumin, but no specific protein was detected in ferroptotic cells in an immunoblot analysis. These results indicate that non-proteinaceous, HNE-like structural moiety was part of the antigen for FerAb, although the binding profiles of FerAb to ferroptotic cells were different from those of the currently available anti-HNE antibody. Immunocytological detection revealed inhomogenous staining within cells and partial co-localization with peripheral mitochondria and other cellular components. FerAb was found to be applicable for ferroptotic cells in other mouse cells and cultured human cells that were examined. Thus, the properties of the rat monoclonal antibody FerAb established in this study promise to be useful for the characterization of ferroptotic cell death.

铁死亡是一种受调节的非凋亡细胞死亡，其中亚铁和脂质过氧化产物起重要作用。虽然铁死亡途径现在正在揭开面纱，但很难确定其参与原位，因为没有已知的铁死亡细胞的独特标记。在这项研究中，我们报告了针对小鼠来源的 Hepa 1-6 细胞培养的大鼠单克隆抗体，这些细胞在缺乏胱氨酸的培养基中培养。所得抗体（称为 FerAb）的结合在由胱氨酸剥夺以及用依拉汀或 RSL3 处理引起的铁死亡进展期间增加，而由星形孢菌素处理诱导的凋亡细胞死亡对结合没有影响。发现 FerAb 与 4-羟基-2-壬烯醛 (HNE) 修饰的牛血清白蛋白结合，但在免疫印迹分析中没有在铁死亡细胞中检测到特定的蛋白质。这些结果表明，非蛋白质、HNE 样结构部分是 FerAb 抗原的一部分，尽管 FerAb 与铁死亡细胞的结合谱与目前可用的抗 HNE 抗体的结合谱不同。免疫细胞学检测显示细胞内染色不均匀，部分与外周线粒体和其他细胞成分共定位。发现 FerAb 适用于其他被检查的小鼠细胞和培养的人类细胞中的铁死亡细胞。因此，本研究中建立的大鼠单克隆抗体 FerAb 的特性有望用于表征铁死亡细胞死亡。HNE 样结构部分是 FerAb 抗原的一部分，尽管 FerAb 与铁死亡细胞的结合谱与目前可用的抗 HNE 抗体的结合谱不同。免疫细胞学检测显示细胞内染色不均匀，部分与外周线粒体和其他细胞成分共定位。发现 FerAb 适用于其他被检查的小鼠细胞和培养的人类细胞中的铁死亡细胞。因此，本研究中建立的大鼠单克隆抗体 FerAb 的特性有望用于表征铁死亡细胞死亡。HNE 样结构部分是 FerAb 抗原的一部分，尽管 FerAb 与铁死亡细胞的结合谱与目前可用的抗 HNE 抗体的结合谱不同。免疫细胞学检测显示细胞内染色不均匀，部分与外周线粒体和其他细胞成分共定位。发现 FerAb 适用于其他被检查的小鼠细胞和培养的人类细胞中的铁死亡细胞。因此，本研究中建立的大鼠单克隆抗体 FerAb 的特性有望用于表征铁死亡细胞死亡。免疫细胞学检测显示细胞内染色不均匀，部分与外周线粒体和其他细胞成分共定位。发现 FerAb 适用于其他被检查的小鼠细胞和培养的人类细胞中的铁死亡细胞。因此，本研究中建立的大鼠单克隆抗体 FerAb 的特性有望用于表征铁死亡细胞死亡。免疫细胞学检测显示细胞内染色不均匀，部分与外周线粒体和其他细胞成分共定位。发现 FerAb 适用于其他被检查的小鼠细胞和培养的人类细胞中的铁死亡细胞。因此，本研究中建立的大鼠单克隆抗体 FerAb 的特性有望用于表征铁死亡细胞死亡。