Numerous studies of native proteins have been reported on protein folding in this half century. Recently, post-translationally modified proteins are also focused on protein folding. However, it is still difficult to prepare such types of proteins because it requires not only the chemical but also the recombinant techniques. Native chemical ligation (NCL) is a powerful technique for producing target proteins when combined with recombinant techniques, such as expressed protein ligation (EPL). NCL basically requires an N-terminal peptide with a thioester and a C-terminal peptide which should possess a Cys residue at the N-terminus. Numerous efforts have been made to prepare N-terminal peptides carrying a thioester or a derivative thereof. However, a method for preparing C-terminal Cys-peptides with post-translational modifications has not been well developed, making it difficult to prepare such C-terminal Cys-peptides, except for chemical syntheses or enzymatic digestion. We report here on the development of a convenient technique that involves acid hydrolysis at the -Asp-Cys- sequence, to effectively obtain a C-terminal peptide fragment that can be used for any protein synthesis when combined with EPL, even under denatured conditions. Thus, this chemical digestion strategy permits the NCL strategy to be dramatically accelerated for protein syntheses in which post-translational modifications, such as glycosylation, phosphorylation, etc. are involved. In addition, this method should be useful to prepare the post-translationally modified proteins for protein folding.

在此半个世纪以来，已有许多关于天然蛋白质的研究报道。最近，翻译后修饰的蛋白质也集中在蛋白质折叠上。但是，制备此类蛋白质仍然很困难，因为它不仅需要化学试剂，还需要重组技术。当与重组技术（例如表达的蛋白连接（EPL））结合使用时，天然化学连接（NCL）是一种强大的技术，可用于生产目标蛋白。NCL基本上需要带有硫酯的N末端肽和在N末端应具有Cys残基的C末端肽。为了制备带有硫酯或其衍生物的N端肽，已经作了许多努力。然而，尚没有开发出具有翻译后修饰的C末端Cys肽的方法，这使得除化学合成或酶消化外，难以制备这种C末端Cys肽。我们在这里报告了一种便利技术的开发过程，该技术涉及在-Asp-Cys-序列处进行酸水解，以有效地获得C端肽片段，即使在变性条件下，与EPL结合也可用于任何蛋白质合成。因此，这种化学消化策略使NCL策略可以大大加速蛋白质合成，其中涉及翻译后修饰，例如糖基化，磷酸化等。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。除了化学合成或酶消化以外，这使得很难制备这样的C端Cys肽。我们在这里报告了一种方便的技术的开发，该技术涉及在-Asp-Cys-序列上进行酸水解，以有效地获得C端肽片段，该片段可与EPL结合甚至在变性条件下用于任何蛋白质合成。因此，这种化学消化策略使蛋白质合成中的NCL策略得以大大加速，其中涉及翻译后修饰（例如糖基化，磷酸化等）。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。除了化学合成或酶消化以外，这使得很难制备这样的C端Cys肽。我们在这里报告了一种便利技术的开发过程，该技术涉及在-Asp-Cys-序列处进行酸水解，以有效地获得C端肽片段，即使在变性条件下，与EPL结合也可用于任何蛋白质合成。因此，这种化学消化策略使NCL策略可以大大加速蛋白质合成，其中涉及翻译后修饰，例如糖基化，磷酸化等。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。我们在这里报告了一种便利技术的开发过程，该技术涉及在-Asp-Cys-序列处进行酸水解，以有效地获得C端肽片段，即使在变性条件下，与EPL结合也可用于任何蛋白质合成。因此，这种化学消化策略使蛋白质合成中的NCL策略得以大大加速，其中涉及翻译后修饰（例如糖基化，磷酸化等）。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。我们在这里报告了一种便利技术的开发过程，该技术涉及在-Asp-Cys-序列处进行酸水解，以有效地获得C端肽片段，即使在变性条件下，与EPL结合也可用于任何蛋白质合成。因此，这种化学消化策略使NCL策略可以大大加速蛋白质合成，其中涉及翻译后修饰，例如糖基化，磷酸化等。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。这种化学消化策略使NCL策略可以大大加速蛋白质合成，其中涉及翻译后修饰，例如糖基化，磷酸化等。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。这种化学消化策略使NCL策略可以大大加速蛋白质合成，其中涉及翻译后修饰（例如糖基化，磷酸化等）。另外，该方法对于制备用于蛋白质折叠的翻译后修饰的蛋白质应该是有用的。