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An Aptamer Linked Immobilized Sorbent Assay (ALISA) to Detect Circulatory IFN-α, an Inflammatory Protein among Tuberculosis Patients
ACS Combinatorial Science Pub Date : 2020-10-16 , DOI: 10.1021/acscombsci.0c00108 Vibha Taneja 1, 2, 3, 4 , Manish Goel 5 , Uma Shankar 6 , Amit Kumar 6 , Gopi C Khilnani 5 , Hanumanthappa K Prasad 4 , Godavari B K S Prasad 2 , Umesh D Gupta 1 , Tarun K Sharma 3
ACS Combinatorial Science Pub Date : 2020-10-16 , DOI: 10.1021/acscombsci.0c00108 Vibha Taneja 1, 2, 3, 4 , Manish Goel 5 , Uma Shankar 6 , Amit Kumar 6 , Gopi C Khilnani 5 , Hanumanthappa K Prasad 4 , Godavari B K S Prasad 2 , Umesh D Gupta 1 , Tarun K Sharma 3
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Dysregulation of IFN-α is the basis for pathogenesis of autoimmune as well as infectious diseases. Identifying inflammatory signatures in peripheral blood of patients is an approach for monitoring active infection. Hence, estimation of type I IFNs as an inflammatory biomarker to scrutinize disease status after treatment is useful. Accordingly, an Aptamer Linked Immobilized Sorbent Assay (ALISA) for the detection of IFN-α in serum samples was developed. Sixteen aptamers were screened for their ability to bind IFN-α. Aptamer IFNα-3 exhibited specificity for IFN-α with no cross-reactivity with interferons β and γ and human serum albumin. The disassociation constant (Kd) was determined to be 3.96 ± 0.36 nM, and the limit of detection was ∼2 ng. The characterized IFNα-3 aptamer was used in ALISA to screen tuberculosis (TB) patients’ sera. An elevated IFN-α level in sera derived from untreated TB patients (median = 0.31), compared to nontuberculous household contacts (median = 0.13) and healthy volunteers (median = 0.12), and further a decline in IFN-α level among treated patients (median = 0.13) were seen. The ALISA assay facilitates direct estimation of inflammatory protein(s) in circulation unlike mRNA estimation by real time PCR. Designing of aptamers similar to the IFNα-3 aptamer provides a novel approach to assess other inflammatory protein(s) in patients before, during, and after completion of treatment and would denote clinical improvement in successfully treated patients.
中文翻译：
适体连接的固定化吸附剂测定 (ALISA) 检测循环 IFN-α，这是结核病患者中的一种炎症蛋白
IFN-α 的失调是自身免疫和传染病发病机制的基础。识别患者外周血中的炎症特征是监测活动性感染的一种方法。因此，估计 I 型干扰素作为炎症生物标志物以检查治疗后的疾病状态是有用的。因此，开发了用于检测血清样品中的 IFN-α 的适体连接的固定化吸附剂测定 (ALISA)。筛选了 16 种适体结合 IFN-α 的能力。适体 IFNα-3 表现出对 IFN-α 的特异性，与干扰素 β 和 γ 以及人血清白蛋白无交叉反应。解离常数 ( K d) 被确定为 3.96 ± 0.36 nM，检测限为~2 ng。已表征的 IFNα-3 适体用于 ALISA 筛选结核病 (TB) 患者的血清。与非结核家庭接触者（中位数 = 0.13）和健康志愿者（中位数 = 0.12）相比，未经治疗的结核病患者（中位数 = 0.31）血清中 IFN-α 水平升高，并且在接受治疗的患者中 IFN-α 水平进一步下降（中位数 = 0.13）。与通过实时 PCR 估计 mRNA 不同，ALISA 测定有助于直接估计循环中的炎症蛋白。设计与 IFNα-3 适配体相似的适配体提供了一种新的方法来评估患者在治疗前、治疗中和治疗后的其他炎症蛋白，并表示成功治疗患者的临床改善。
更新日期：2020-11-09
中文翻译：
适体连接的固定化吸附剂测定 (ALISA) 检测循环 IFN-α，这是结核病患者中的一种炎症蛋白
IFN-α 的失调是自身免疫和传染病发病机制的基础。识别患者外周血中的炎症特征是监测活动性感染的一种方法。因此，估计 I 型干扰素作为炎症生物标志物以检查治疗后的疾病状态是有用的。因此，开发了用于检测血清样品中的 IFN-α 的适体连接的固定化吸附剂测定 (ALISA)。筛选了 16 种适体结合 IFN-α 的能力。适体 IFNα-3 表现出对 IFN-α 的特异性，与干扰素 β 和 γ 以及人血清白蛋白无交叉反应。解离常数 ( K d) 被确定为 3.96 ± 0.36 nM，检测限为~2 ng。已表征的 IFNα-3 适体用于 ALISA 筛选结核病 (TB) 患者的血清。与非结核家庭接触者（中位数 = 0.13）和健康志愿者（中位数 = 0.12）相比，未经治疗的结核病患者（中位数 = 0.31）血清中 IFN-α 水平升高，并且在接受治疗的患者中 IFN-α 水平进一步下降（中位数 = 0.13）。与通过实时 PCR 估计 mRNA 不同，ALISA 测定有助于直接估计循环中的炎症蛋白。设计与 IFNα-3 适配体相似的适配体提供了一种新的方法来评估患者在治疗前、治疗中和治疗后的其他炎症蛋白，并表示成功治疗患者的临床改善。
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