The aim of the current work was to evaluate applicability of triacetate cellulose hollow fiber vitrification (HFV) method for cryopreservation of groups of in vitro matured bovine oocytes (12-17 oocytes per device). We also attempted to optimize HFV protocol by altering concentration of non-permeating cryoprotectant (sucrose) in vitrification solution and concentration of extracellular Ca2+ by using a calcium-free base medium for preparation of vitrification/rewarming solutions with ethylene glycol (EG) as a single permeating cryoprotectant. Neither of modifications of HFV protocol significantly affected survival or fertilization rates of the vitrified bovine oocytes. Embryo development rates in the vitrification groups were lower than those in the control (31.2% of blastocysts at Day 8 post IVF). Use of vitrification/rewarming solutions with lower Ca2+ concentration and EG did not significantly improve embryo development rates. An increase of sucrose concentration in vitrification solution from 0.5 to 1.0 M significantly improved blastocyst yield on Day 8 post IVF (21.1-23.4% vs 3.1-3.5%; p < 0.05). Obtained results indicated that sufficient dehydration of the oocytes and/or the solution surrounding them in hollow fiber before immersion into liquid nitrogen is an important factor for successful vitrification. Use of HFV method allowed simplification and standardization of vitrification/rewarming procedures. Triacetate cellulose hollow fibers can be used successfully for cryopeservation of groups of in vitro matured bovine oocytes.

中文翻译：

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体外成熟牛卵母细胞冷冻保存三醋酸纤维素中空纤维玻璃化（HFV）方法的优化

当前工作的目的是评估三醋酸纤维素中空纤维玻璃化 (HFV) 方法对体外成熟牛卵母细胞组（每个装置 12-17 个卵母细胞）进行冷冻保存的适用性。我们还尝试通过改变玻璃化溶液中非渗透性冷冻保护剂 (蔗糖) 的浓度和细胞外 Ca2+ 的浓度来优化 HFV 协议，方法是使用无钙基础培养基制备乙二醇 (EG) 作为单一的玻璃化/复温溶液。渗透性冷冻保护剂。HFV 协议的修改均未显着影响玻璃化牛卵母细胞的存活率或受精率。玻璃化冷冻组的胚胎发育率低于对照组（IVF 后第 8 天的囊胚率为 31.2%）。使用具有较低 Ca2+ 浓度和 EG 的玻璃化/复温溶液并没有显着提高胚胎发育率。在体外受精后第 8 天，玻璃化冷冻溶液中蔗糖浓度从 0.5 增加到 1.0 M 显着提高了囊胚产量（21.1-23.4% 与 3.1-3.5%；p < 0.05）。获得的结果表明，在浸入液氮之前，卵母细胞和/或围绕它们的中空纤维溶液的充分脱水是成功玻璃化的重要因素。使用 HFV 方法可以简化和标准化玻璃化/复温程序。三醋酸纤维素中空纤维可成功用于体外成熟牛卵母细胞组的冷冻保存。在体外受精后第 8 天，玻璃化冷冻溶液中蔗糖浓度从 0.5 增加到 1.0 M 显着提高了囊胚产量（21.1-23.4% 与 3.1-3.5%；p < 0.05）。获得的结果表明，在浸入液氮之前，卵母细胞和/或围绕它们的中空纤维溶液的充分脱水是成功玻璃化的重要因素。使用 HFV 方法可以简化和标准化玻璃化/复温程序。三醋酸纤维素中空纤维可成功用于体外成熟牛卵母细胞组的冷冻保存。在体外受精后第 8 天，玻璃化冷冻溶液中蔗糖浓度从 0.5 增加到 1.0 M 显着提高了囊胚产量（21.1-23.4% 对 3.1-3.5%；p < 0.05）。获得的结果表明，在浸入液氮之前，卵母细胞和/或围绕它们的中空纤维溶液的充分脱水是成功玻璃化的重要因素。使用 HFV 方法可以简化和标准化玻璃化/复温程序。三醋酸纤维素中空纤维可成功用于体外成熟牛卵母细胞组的冷冻保存。获得的结果表明，在浸入液氮之前，卵母细胞和/或围绕它们的中空纤维溶液的充分脱水是成功玻璃化的重要因素。使用 HFV 方法可以简化和标准化玻璃化/复温程序。三醋酸纤维素中空纤维可成功用于体外成熟牛卵母细胞组的冷冻保存。获得的结果表明，在浸入液氮之前，卵母细胞和/或围绕它们的中空纤维溶液的充分脱水是成功玻璃化的重要因素。使用 HFV 方法可以简化和标准化玻璃化/复温程序。三醋酸纤维素中空纤维可成功用于体外成熟牛卵母细胞组的冷冻保存。