Acorn barnacles are major marine fouling organisms. Their success is largely due to an ability to adhere to diverse substrates via a sub-micron thick proteinaceous adhesive layer that develops as the organism molts and expands its base. Recent work has expanded the set of proteins identified within the adhesive interface, but one outstanding question concerns their spatial distribution throughout the organism. Here, we employ immunological analysis of Amphibalanus amphitrite tissue sections and identify the presence of two cement proteins, AaCP19-1 and AaCP43-1, in areas far removed from the adhesive interface. Confocal imaging reveals specific staining along different tissue linings of the organism as well as other non-cementing regions. Additionally, we employ a modified, pressure cycling technology approach to recover protein from histological tissue sections to perform proteomics analysis. Mass spectrometry analysis of proteins recovered from transverse histological sections of the upper portion of barnacles indicates the presence of these same proteins, complementing the immunostaining observations. The proteomics analysis also revealed the presence of other proteins first identified in the adhesive layer. While some proteins are clearly enriched at the surface interface, our findings challenge the concept that cement proteins are exclusive to the substrate interface and suggest they may have an expanded physiological role beyond substrate adhesion-related processes of A. amphitrite.

中文翻译：

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橡子藤壶 Amphibalanus amphitrite 中精选水泥蛋白的分布

橡子藤壶是主要的海洋污损生物。它们的成功主要是由于能够通过亚微米厚的蛋白质粘附层粘附在不同的基材上，该粘附层随着生物体蜕皮和扩展其基部而形成。最近的工作扩展了在粘合界面内鉴定的蛋白质组，但一个突出的问题涉及它们在整个生物体中的空间分布。在这里，我们对 Amphibalanus amphitrite 组织切片进行免疫学分析，并确定在远离粘合剂界面的区域中存在两种水泥蛋白 AaCP19-1 和 AaCP43-1。共聚焦成像揭示了沿生物体不同组织衬里以及其他非胶结区域的特定染色。此外，我们采用了经过修改的，压力循环技术方法从组织学组织切片中回收蛋白质以进行蛋白质组学分析。从藤壶上部的横向组织切片中回收的蛋白质的质谱分析表明存在这些相同的蛋白质，补充了免疫染色观察。蛋白质组学分析还揭示了其他蛋白质的存在，这些蛋白质最初是在粘附层中发现的。虽然一些蛋白质在表面界面上明显富集，但我们的研究结果挑战了水泥蛋白专属于基材界面的概念，并表明它们可能具有超出 A. amphitrite 基材粘附相关过程的扩展生理作用。从藤壶上部的横向组织切片中回收的蛋白质的质谱分析表明存在这些相同的蛋白质，补充了免疫染色观察。蛋白质组学分析还揭示了其他蛋白质的存在，这些蛋白质最初是在粘附层中发现的。虽然一些蛋白质在表面界面上明显富集，但我们的研究结果挑战了水泥蛋白专属于基材界面的概念，并表明它们可能具有超出 A. amphitrite 基材粘附相关过程的扩展生理作用。从藤壶上部的横向组织切片中回收的蛋白质的质谱分析表明存在这些相同的蛋白质，补充了免疫染色观察。蛋白质组学分析还揭示了其他蛋白质的存在，这些蛋白质最初是在粘附层中发现的。虽然一些蛋白质在表面界面上明显富集，但我们的研究结果挑战了水泥蛋白专属于基材界面的概念，并表明它们可能具有超出 A. amphitrite 基材粘附相关过程的扩展生理作用。