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Roles of Pyk2 in signal transduction after gonadotropin‐releasing hormone receptor stimulation
Journal of Cellular Physiology ( IF 4.5 ) Pub Date : 2020-09-27 , DOI: 10.1002/jcp.30077 Shiho Okitsu-Sakurayama 1 , Sayomi Higa-Nakamine , Hidetsugu Torihara 1 , Shigeki Higashiyama 2 , Hideyuki Yamamoto 1
Journal of Cellular Physiology ( IF 4.5 ) Pub Date : 2020-09-27 , DOI: 10.1002/jcp.30077 Shiho Okitsu-Sakurayama 1 , Sayomi Higa-Nakamine , Hidetsugu Torihara 1 , Shigeki Higashiyama 2 , Hideyuki Yamamoto 1
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The receptor for gonadotropin‐releasing hormone (GnRH) is highly expressed in hypothalamic neurons. It has been reported that GnRH treatment of cultured GnRH neurons (GT1‐7 cells) activated proline‐rich tyrosine kinase 2 (Pyk2), and Pyk2 was involved in the activation of extracellular signal‐regulated protein kinase 1 (ERK1) and ERK2 (ERK1/2). In the present study, we first examined the possibility that GnRH treatment might activate epidermal growth factor receptor (EGFR). We found that activation of EGFR after GnRH treatment for 5 min was much less than after EGF or heparin‐binding EGF treatment. Next, we examined whether or not Pyk2 bound to growth factor receptor‐binding protein 2 (Grb2). We overexpressed FLAG‐fused Pyk2 in GT1‐7 cells, and immunoprecipitated Pyk2 using an anti‐FLAG antibody. The binding of Pyk2 to Grb2 was detected only after GnRH treatment. In contrast, a site‐directed mutant of Pyk2 wherein tyrosine 881 was mutated to phenylalanine did not bind to Grb2. Studies with small interfering RNA and inhibitors indicated that the activation of Grb2/Ras/Raf/MEK was a major pathway to ERK1/2 activation after the short‐term treatment of GT1‐7 cells with GnRH.
中文翻译：
Pyk2 在促性腺激素释放激素受体刺激后信号转导中的作用
促性腺激素释放激素 (GnRH) 受体在下丘脑神经元中高度表达。据报道，GnRH 处理培养的 GnRH 神经元（GT1-7 细胞）激活富含脯氨酸的酪氨酸激酶 2（Pyk2），Pyk2 参与激活细胞外信号调节蛋白激酶 1（ERK1）和 ERK2（ERK1） /2）。在本研究中，我们首先检查了 GnRH 治疗可能激活表皮生长因子受体 (EGFR) 的可能性。我们发现 GnRH 治疗 5 分钟后 EGFR 的激活远低于 EGF 或肝素结合 EGF 治疗后。接下来，我们检查了 Pyk2 是否与生长因子受体结合蛋白 2（Grb2）结合。我们在 GT1-7 细胞中过表达 FLAG 融合的 Pyk2，并使用抗 FLAG 抗体免疫沉淀 Pyk2。Pyk2 与 Grb2 的结合仅在 GnRH 处理后检测到。相比之下，酪氨酸 881 突变为苯丙氨酸的 Pyk2 定点突变体不与 Grb2 结合。对小干扰 RNA 和抑制剂的研究表明，在用 GnRH 短期处理 GT1-7 细胞后，Grb2/Ras/Raf/MEK 的激活是 ERK1/2 激活的主要途径。
更新日期：2020-09-27
中文翻译：
Pyk2 在促性腺激素释放激素受体刺激后信号转导中的作用
促性腺激素释放激素 (GnRH) 受体在下丘脑神经元中高度表达。据报道，GnRH 处理培养的 GnRH 神经元（GT1-7 细胞）激活富含脯氨酸的酪氨酸激酶 2（Pyk2），Pyk2 参与激活细胞外信号调节蛋白激酶 1（ERK1）和 ERK2（ERK1） /2）。在本研究中，我们首先检查了 GnRH 治疗可能激活表皮生长因子受体 (EGFR) 的可能性。我们发现 GnRH 治疗 5 分钟后 EGFR 的激活远低于 EGF 或肝素结合 EGF 治疗后。接下来，我们检查了 Pyk2 是否与生长因子受体结合蛋白 2（Grb2）结合。我们在 GT1-7 细胞中过表达 FLAG 融合的 Pyk2，并使用抗 FLAG 抗体免疫沉淀 Pyk2。Pyk2 与 Grb2 的结合仅在 GnRH 处理后检测到。相比之下，酪氨酸 881 突变为苯丙氨酸的 Pyk2 定点突变体不与 Grb2 结合。对小干扰 RNA 和抑制剂的研究表明，在用 GnRH 短期处理 GT1-7 细胞后，Grb2/Ras/Raf/MEK 的激活是 ERK1/2 激活的主要途径。
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