Colorectal cancer (CRC) is one of the most commonly diagnosed tumors among human worldwide. Angiogenesis and tumor-associated macrophage (TAM) recruitment are closely associated with CRC development. Nevertheless, the mechanisms revealing CRC progression are still not fully understood. 5′-Nucleotidase domain containing 2 (NT5DC2), a member of the NT5DC family, modulates various cellular events to mediate tumor growth, and thus serves as a disgnostic biomarker. Here, we explored the potential of NT5DC2 on tumor progression in CRC. We first found that NT5DC2 expression was significantly up-regulated in CRC tissues and cell lines. CRC patients with higher NT5DC2 expression showed poor overall survival. Furthermore, CRC cell lines stably transfected with shNT5DC2 lentivirus plasmids exhibited markedly reduced cell proliferation, migration and invasion compared with the negative control group. Hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor A (VEGF-A) expression levels were remarkably reduced in CRC cells with NT5DC2 deletion, along with evidently reduced tube formation in the HUVECs cultured in the collected conditional medium. The expression levels of CC chemokine ligand 2 (CCL2) and its receptor CCR2 were found to be greatly down-regulated in CRC cells transfected with shNT5DC2. Moreover, NT5DC2 knockdown markedly suppressed the activation of protein kinase-B/nuclear transcription factor κB (AKT/NF-κB) signaling in CRC cells. Furthermore, we found that NT5DC2 deletion obviously reduced the TAM recruitments through suppressing CCL2/CCR2 and AKT/NF-κB signaling pathways. Intriguingly, our in vitro experiments demonstrated that VEGF reduction was necessary for shNT5DC2-inhibited cell proliferation, migration, invasion, angiogenesis and TAM recruitment. In vivo studies also confirmed that NT5DC2 knockdown effectively reduced the tumor growth and VEGF expression in a xonegraft mouse model with CRC. Lung metastasis of CRC cells was also hindered by NT5DC2 deletion in vivo. Collectively, our results indicated a previously unrecognized NT5DC2/VEGF/CCL2 axis involved in CRC development and metastasis.

大肠癌（CRC）是全世界人类中最常被诊断的肿瘤之一。血管生成和肿瘤相关巨噬细胞（TAM）募集与CRC的发展密切相关。尽管如此，揭示CRC进展的机制仍不完全清楚。包含2（NT5DC2）的5'-核苷酸酶结构域（NT5DC家族的一个成员）调节各种细胞事件以介导肿瘤的生长，因此可作为生物标志物。在这里，我们探索了NT5DC2对CRC肿瘤进展的潜力。我们首先发现NT5DC2表达在CRC组织和细胞系中显着上调。NT5DC2表达较高的CRC患者的总生存期较差。此外，用shNT5DC2慢病毒质粒稳定转染的CRC细胞系细胞增殖明显降低，迁移和侵袭与阴性对照组相比。在缺失NT5DC2的CRC细胞中，缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子A（VEGF-A）的表达水平显着降低，并且在收集的条件培养基中培养的HUVEC中管的形成明显减少。发现在用shNT5DC2转染的CRC细胞中CC趋化因子配体2（CCL2）及其受体CCR2的表达水平大大下调。此外，NT5DC2敲低显着抑制了CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的 在缺失NT5DC2的CRC细胞中，缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子A（VEGF-A）的表达水平显着降低，并且在收集的条件培养基中培养的HUVEC中管的形成明显减少。发现在用shNT5DC2转染的CRC细胞中CC趋化因子配体2（CCL2）及其受体CCR2的表达水平大大下调。此外，NT5DC2敲低显着抑制了CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的 在缺失NT5DC2的CRC细胞中，缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子A（VEGF-A）的表达水平显着降低，并且在收集的条件培养基中培养的HUVEC中管的形成明显减少。发现在用shNT5DC2转染的CRC细胞中CC趋化因子配体2（CCL2）及其受体CCR2的表达水平大大下调。此外，NT5DC2敲低显着抑制了CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的 以及在收集的条件培养基中培养的HUVEC中显着减少的管形成。发现在用shNT5DC2转染的CRC细胞中CC趋化因子配体2（CCL2）及其受体CCR2的表达水平大大下调。此外，NT5DC2敲低显着抑制了CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的 以及在收集的条件培养基中培养的HUVEC中显着减少的管形成。发现在用shNT5DC2转染的CRC细胞中CC趋化因子配体2（CCL2）及其受体CCR2的表达水平大大下调。此外，NT5DC2敲低显着抑制了CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的 NT5DC2敲低显着抑制CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的 NT5DC2敲低显着抑制CRC细胞中蛋白激酶B /核转录因子κB（AKT /NF-κB）信号的激活。此外，我们发现NT5DC2缺失通过抑制CCL2 / CCR2和AKT /NF-κB信号通路明显减少了TAM募集。有趣的是，我们的体外实验表明，VEGF的减少对于shNT5DC2抑制细胞的增殖，迁移，侵袭，血管生成和TAM募集是必需的。体内研究还证实，在具有CRC的异种移植小鼠模型中，NT5DC2敲低可有效减少肿瘤的生长和VEGF的表达。NT5DC2体内缺失也阻碍了CRC细胞的肺转移。总体而言，我们的研究结果表明，先前尚未识别的NT5DC2 / VEGF / CCL2轴参与了CRC的发展和转移。